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培養(yǎng)基及其制備方法（中國(guó)藥典2005年版二部）
中國(guó)藥典2005年版二部
培養(yǎng)基及其制備方法
培養(yǎng)基應(yīng)通過質(zhì)量鑒定，適合規(guī)定菌的生長(zhǎng)，并使其具有典型菌落形態(tài)特征或典型生化反應(yīng)特性?？砂聪铝刑幏脚渲?，亦可用符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基制備。配制培養(yǎng)基g扣馀另有規(guī)定外，培養(yǎng)基制備的高壓蒸汽滅菌溫度為121℃ 15min。
1.1 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基
胨 10g 牛肉浸出粉 3g
氯化鈉 5g 水 1000ml
取上述成分，混合，微溫溶解后，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，濾清，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2±0.2，滅菌。
1.2 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基
照上述營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的處方及制法，加入14g瓊脂，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2±0.2，
滅菌。
1.3 半固體營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基
照上述營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的處方及制法，其中瓊脂加入量為0.3％～0.5％。
1.4 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基
胨 5g 玫瑰紅鈉 0.0133g
葡萄糖 10g （或0.133％玫瑰紅鈉溶液 10ml）
磷酸二氫鉀（KHzPO+） lg 瓊脂 14g
*（MgSO4•7H20） 0.5g 水 1000ml
除葡萄糖、玫瑰紅鈉外，取上述成分，混合，加熱溶化后，濾過，加入葡萄糖、玫瑰紅鈉，分裝，滅菌。
1.5 酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（YPD）
胨 10g 瓊脂 14g
酵母浸出粉 5g 水 1000ml
葡萄糖 10g
除葡萄糖外，取上述成分，混合，加熱溶化后，濾過，加入葡萄糖，分裝，滅菌。
1.6 膽鹽乳糖培養(yǎng)基（BL）
胨 20g 磷酸二氫鉀（KH2PO4） 1.3g
乳糖 5g 牛膽鹽（或去氧膽酸鈉0.25g） 1.3g
氯化鈉 5g 水 1000ml
*（K2HPO4） lg
除乳糖、牛膽鹽外，取上述成分，混合，加熱溶解后，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.2±0，2，煮沸，濾清，加入乳糖、牛膽鹽，分裝，滅菌。
1.7 4-甲基傘形酮葡萄糖苷酸蛋白胨培養(yǎng)基
胨 10g 磷酸二氫鉀（無水KH2PO4） 0.9g
氯化鈣 50mg *（無水Na2HPO：） 6.2g
硫酸錳 0.5mg 硫酸鈉 40mg
硫酸鋅 0.5mg 去氧膽酸鈉 1g
* 0.1g 4-甲基傘形酮葡萄糖苷酸 75mg
氯化鈉 10g 水 1000ml
除4-甲基傘形酮葡萄糖苷酸外，上述各成分溶解于1000ml水中，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為
7.3±0.1，加人4-甲基傘形酮葡萄糖苷酸，溶解后，每管分裝5ml，115滅菌20min。
1.8 曙紅*瓊脂培養(yǎng)基（EMB）
營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 100ml 曙紅鈉指示液 2ml
20％乳糖溶液 5ml 甲藍(lán)指示液 1.3～1.6ml
取營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，加熱溶化后，冷至60~C，按無菌操作加入滅菌的其它三種溶液，搖勻，傾注平皿。
1.9 麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（MacC）
胨 20g 1％中性紅指示液 2.5ml
乳糖 10g 瓊脂 14g
牛膽鹽 5g 氯化鈉 5g
水 1000ml
除乳糖、指示液、牛膽鹽及瓊脂外，取上述成分混合，加熱溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.2±0.2，加入瓊脂，加熱溶化后，再加入其余各成分，搖勻，分裝，滅菌，冷至60℃，傾注平皿。
1.10 三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基（TSl）
胨 20g * 0.2g
牛肉浸出粉 5g * 0.2g
乳糖 10g 0.2％酚磺酞指示液 12.5ml
蔗糖 10g 瓊脂 14g
葡萄糖 1g 氯化鈉 5g
水 1000ml
除三糖、指示液和瓊脂外，取上述成分混合，加熱溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.3±0.1，加入瓊脂，加熱溶化后，再加入其余各成分，搖勻，分裝，滅菌，制成高底層（2～3cm）短斜面。
1.11 四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基（TTB）
胨 5g * 30g
牛膽鹽 1g 碳酸鈣 10g
水 1000ml
加入上述成分，混合，微溫溶解，滅菌。
臨用前，取上述培養(yǎng)基混勻分裝，每10ml加入碘溶液（取碘6g與*5g，溶于20ml水中）0.2ml和亮綠試液0.1ml，混勻。
1.12 沙門、志賀菌屬瓊脂培養(yǎng)基（SS）
胨 5g * 8.5g
牛肉浸出粉 5g 中性紅指示液 2.5ml
乳糖 10g 亮綠試液 0.33ml
牛膽鹽 8.5g 瓊脂 14g
* 8.5g * 1g
水 1000ml
除乳糖、指示液和瓊脂外，取上述成分混合，加熱溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.2±0.1，濾過，加入瓊脂，加熱溶化后，再加入其余各成分，搖勻，冷至60℃，傾注平皿。
1.13 膽鹽硫乳瓊脂培養(yǎng)基（DHL）
胨 20g * 1g
牛肉浸出粉 3g * 1g
乳糖 10g 中性紅指示液 3ml
蔗糖 10g 瓊脂 14g
去氧膽酸鈉 1g * 2.3g
水 1000ml
除糖、指示液和瓊脂外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.2±0，l，加入瓊脂，加熱溶化后，再加入其余各成分，搖勻，冷至60℃，傾注平皿。
1.14 溴代十六烷基*胺瓊脂培養(yǎng)基
胨 10g 溴代十六烷基*胺 0.3g
牛肉浸出粉 3g 瓊脂 14g
氯化鈉 5g 水 1000ml
除瓊脂外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.5±0.1，加入瓊脂，加熱溶化后，分裝，滅菌，冷 60℃，傾注平皿。
1.15 碲酸鹽肉湯培養(yǎng)基
臨用前，取滅菌的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，每100ml加入新配制的1％亞碲酸鈉（鉀）試液
0.2ml，混勻，即得。
1.16 卵黃氯化鈉肉湯培養(yǎng)基
胨 6.0g 10％氯化鈉卵黃液 100ml
牛肉浸出粉 1.8g 瓊脂 23g
氯化鈉 30g 水 650ml
除10％氯化鈉卵黃液外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.6±0.1，滅菌，待冷至60℃，以無菌操作加入10％氯化鈉卵黃液，充分混勻，勿振搖，傾注平皿。
10％氯化鈉卵黃液的制備取新鮮雞蛋1個(gè)，以無菌操作取出卵黃，放入10％氯化鈉溶液100ml中，充分混勻。
5，17 *氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基
胨 10g 酚磺酞指示液 2.5ml
牛肉浸出粉 1g 瓊脂 14g
* 10g 氯化鈉 75g
水 1000ml
除*、指示液和瓊脂外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.4±0.2，加入瓊脂，加熱溶化后，濾過，分裝，滅菌，冷至60℃，傾注平皿。
1.18 蛋白胨水培養(yǎng)基
胰蛋白胨 10g 氯化鈉 5g
水 1000ml
取上述成分混合，加熱溶化，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.3±0.1，分裝于小試管，滅菌。
1.19 磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基
胨 7g *（K2HPO4） 3.8g
葡萄糖 5g 水 1000ml
取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.3±0.1，分裝于小試管，滅菌。
1.20 枸櫞酸鹽培養(yǎng)基
氯化鈉 5g *（無水） 2g
*（MgS04•7H2O） 0.2g 溴*藍(lán)指示液 20ml
*（K2HPO4） 1g 瓊脂 14g
硫酸二氫銨（NH4H2PO4） lg 水 1000ml
除指示液和瓊脂外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為6.9±0.1，加入瓊脂，加熱溶化，加入指示液，混勻。分裝于小試管，滅菌，制成斜面。
注：所用瓊脂應(yīng)不含游離糖，用前用水浸泡沖洗。
1.21 糖、醇發(fā)酵培養(yǎng)基
基礎(chǔ)液 胨 10g 酸性晶紅指示液 10ml
糖、醇0.5％ （或溴*藍(lán)指示液6ml）
氯化鈉 5g 水 1000ml
取胨和氯化鈉加入水中，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.4，加入指示液，混勻。分裝每瓶100ml，滅菌。
配制葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基時(shí)，于。100ml基礎(chǔ)液加入0.5g葡萄糖，分裝于含杜氏管（Durham）的小試管中，滅菌。配制其它糖、醇發(fā)酵培養(yǎng)基時(shí)，將各種糖、醇分別配成l0％溶液，與基礎(chǔ)液同時(shí)滅菌。以無菌操作將5ml糖、醇溶液加入100ml基礎(chǔ)液內(nèi)，分裝于滅菌小試管中。
注：糖、醇溶液亦可采用薄膜過濾法除菌。
1.22 5％乳糖培養(yǎng)基
胨 0.2g 溴*藍(lán)指示液 6ml
氯化鈉 0.2g 乳糖 5g
* 0.2g 水 100ml
除乳糖和指示液外，混合各成分，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.4，加入乳糖/指示液，混勻，分裝于含小倒管的滅菌小試管中，115℃滅菌15min。
1.23 脲（尿素）瓊脂培養(yǎng)基
胨 1g 酚磺酞指示液 6ml
葡萄糖 0.2g 20％無菌脲溶液 100ml
氯化鈉 5g 瓊脂 14g
磷酸二氫鉀（KHzPO4） 2g 水 900ml
除脲和瓊脂外，取上述成分混合，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.2±0.1，加入瓊脂，加熱溶化并分裝于錐形瓶，滅菌。冷至50～55℃，加入滅菌脲溶液，混勻，分裝于滅菌試管中，制成斜面。
1.24 氰化鉀培養(yǎng)基
胨 3g *（Na2HPO4） 5.64g
氯化鈉 5g 氰化鉀試液 15ml
磷酸二氫鉀（KH2PO4） 0.225g 水 1000ml
除氰化鉀試液外，取上述成分混合，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.5±0.1，滅菌，冷卻后，加入氰化鉀試液，分裝于12mm×100mm滅菌試管內(nèi)，每管4ml，立即用滅菌橡膠塞塞緊，置4℃保存。同時(shí)，不加氰化鉀試液的培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基，分裝于滅菌試管中。
1.25 賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基
胨 5g 1.6％甲酚紫指示液 lml
酵母浸出粉 lg L-賴氨酸（DL-賴氨酸） 0. 5（1）g
葡萄糖 1g 水 1000ml
除賴氨酸外，取上述成分混合，加熱溶解后，加ykL-賴氨酸（DL-賴氨酸），調(diào)節(jié)pH使滅菌后為6.8，同時(shí)以不加賴氨酸培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基管，分裝于滅菌的小試管內(nèi)，每管2.5ml，并滴加一層液體石蠟，121℃滅菌10min。
1.26 綠膿菌素（pyocyanin）測(cè)定用培養(yǎng)基（PDP瓊脂）
胨 20g 甘油 10ml
氯化鎂（無水） 1.4g 瓊脂 14g
硫酸鉀（無水） 10g 水 1000ml
取胨、氯化鎂和硫酸鉀加入水中，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.3±0.1，加入甘油和瓊脂，加熱溶化，混勻，分裝于試管，滅菌，制成斜面。
1.27 明膠培養(yǎng)基
胨 5g 明膠 120g
牛肉浸出粉 3g 水 1000ml
取上述成分加入水中，浸泡約20min，隨時(shí)攪拌，加熱溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.3±0.1，分裝于小試管，每支4～5ml，滅菌。放冷后置冰箱保存。
1.28 硝酸鹽胨水培養(yǎng)基
胨 10g 硝酸鈉 0.5g
酵母浸出粉 3g 水 1000ml
硝酸鉀 2g
取胨和酵母浸出粉加入水中，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.3±0.1，加入硝酸鉀和*溶解，混勻。分裝于含杜氏管的小試管，滅菌。
1.29 庖肉培養(yǎng)基
牛肉碎塊的制備新鮮牛肉，除去脂肪及筋腱，加水煮沸約10min，切成約5mm3的小塊，稱重，按1；3（肉：水）加蒸餾水。置4～10C浸泡18～20h，煮沸1h，用紗布過濾（濾液即為1：3牛肉浸液），肉渣以自來水漂洗2次，然后，加入適量氫氧化鈉液，攪拌，使pH在8.4左右，浸泡過夜，次日傾去上層水，用蒸餾水沖洗2～3次，放在紗布上，自然瀝干（不要擠壓）。將牛肉渣鋪在搪瓷盤上，滅菌，于80～l00℃烘干，篩去碎屑，保持干燥，裝瓶，備用。
庖肉培養(yǎng)基的制備將上述碎肉塊裝入中試管或大試管內(nèi)，約lcm高，再加入營(yíng)養(yǎng)肉湯約lOml或40ml，滅菌，備用，zui終pH應(yīng)為7.3±0.1。
1.30 0.1％葡萄糖庖肉培養(yǎng)基
于庖肉培養(yǎng)基滅菌前加入0.1％葡萄糖分裝大試管，每支40ml，滅菌備用。用于破傷風(fēng)梭菌增菌產(chǎn)毒培養(yǎng)。
1.31 *
營(yíng)養(yǎng)瓊脂 100ml 無菌脫纖維兔血（或羊血） 5～10ml
制法將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化，待冷至50℃左右，以無菌操作吸取無菌脫纖維兔血或羊血加入搖勻，制成平板，置冰箱備用。
1.32 膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基
蛋白胨 20g 0.04％溴甲酚紫 25ml
乳糖 l0g 水 1000ml
脫氧膽酸鈉 0.25g
除指示劑外，取上述成分加至水中，微溫溶解，調(diào)pH值至滅菌后7.2～7，5，加入指示劑，分裝中管，每管lOml，加一倒管。115℃滅菌30min。
1.33 乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基
蛋白胨 20g 0.04％溴甲酚紫 25ml
乳糖 l0g 水 1000ml
除指示劑外，取上述成分加至水中，微溫溶解，調(diào)pH值使滅菌后為7.2～7.4，加入指示劑，分裝小管，每管3ml，加一倒管，115℃滅菌30min。
1.34 哥倫比 （Columbia）瓊脂培養(yǎng)基
胰酪胨 log 玉米淀粉 1s
肉胃消化物 5g 氯化鈉 5g
心*消化物 3g 瓊脂（按凝固力） 12～15g
酵母浸出粉 5g 水 1000ml
稱上述成分，加水，搖勻，加熱至沸。如必要，調(diào)pH使滅菌后為7.1～7.5。121℃滅菌15min。冷至40～50℃，必要時(shí)加硫酸*相當(dāng)于*20mg，搖勻，注皿。
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