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技術(shù)文章

大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)使用說(shuō)明書(shū)

點(diǎn)擊次數(shù):264 發(fā)布時(shí)間:2011-10-17

 

本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
 
大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1PECAM-1)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA
使用說(shuō)明書(shū)
                                                      
【大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1)Elisa試劑盒試劑盒名稱】
大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1PECAM-1)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA
【大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1)Elisa試劑盒試劑盒用途
定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、組織液及其它相關(guān)液體樣本中血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1PECAM-1的含量。
【大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1)Elisa試劑盒檢測(cè)原理
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1PECAM-1單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,再加入酶標(biāo)工作液,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1PECAM-1濃度呈正相關(guān),450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,計(jì)算樣本中大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1PECAM-1含量。
【大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1)Elisa試劑盒試劑盒組成

1
酶標(biāo)包被板
12×4
7
顯色劑A
3mL
2
標(biāo)準(zhǔn)品
0.3mL×6
8
顯色劑B
3mL
3
20倍濃縮洗滌液
15mL
9
終止液
3mL
4
*
3mL
10
說(shuō)明書(shū)
1
5
特殊稀釋液
3mL
11
封板膜
2
6
酶標(biāo)試劑
3mL
12
密封袋
1個(gè)

備注:標(biāo)準(zhǔn)品(1號(hào)6號(hào))濃度依次為:16、8、4、2、1、0.5μg/L
 
【大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1)Elisa試劑盒需要而未提供的試劑和器材
1、37恒溫箱
2、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
3、精密移液器及一次性吸頭
4、蒸餾水
5、一次性試管
6、吸水紙
【大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1)Elisa試劑盒操作步驟】
1、準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔,記錄各孔位置,在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL;待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL,再加*40μL(即樣本稀釋5倍);空白對(duì)照孔不加。
4、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育30min
5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板)。
6、加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,空白對(duì)照孔不加。
7、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育30min
8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板)。
9、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μL,再加入顯色劑B 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37避光顯色15min。
10、終止:取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11、測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值(OD值)。
12、計(jì)算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
【大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1)Elisa試劑盒樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3,因?yàn)?/span>疊氮鈉(NaN3)是辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒。
【大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1)Elisa試劑盒注意事項(xiàng)】
1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
2、酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè),取平均值,以減小實(shí)驗(yàn)誤差。
4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。
5、本試劑盒定量范圍為0.5-16μg/L,超過(guò)此范圍,為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得,不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果,請(qǐng)用特殊稀釋液稀釋后測(cè)定準(zhǔn)確結(jié)果(0.5-16μg/L范圍內(nèi)),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。
6、若顯色過(guò)淺,可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間。
7、為避免交叉污染,標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液、*和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜。
8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號(hào)的試劑不得混用。
9、底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。
 
【大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1)Elisa試劑盒操作程序總結(jié)】
 
準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
 

 
加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)30分鐘
 
洗板4次,加入酶標(biāo)試劑,37℃反應(yīng)30分鐘
 
洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘
 
加入終止液
 
15分鐘之內(nèi)讀OD值
 
計(jì)算
 
【大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1)Elisa試劑盒檢測(cè)范圍
0.5μg/L - 16μg/L
【大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1)Elisa試劑盒規(guī)格】
48人份/盒
【大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1)Elisa試劑盒貯藏】
2-8,避光防潮保存。
【大鼠血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1)Elisa試劑盒有效期】
6個(gè)月

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