離心機(jī)是生物學(xué)教學(xué)及科研領(lǐng)域中的常見儀器，離心技術(shù)也是分離、制備、純化生物樣品的重要手段。下面小編給大家介紹一下實(shí)驗(yàn)室常用離心法之差速離心法:

一、原理

差速離心是根據(jù)顆粒大小和密度不同造成沉降速度(即沉降系數(shù))的差異，通過分級提高離心轉(zhuǎn)速或高速與低速離心交替進(jìn)行，使具有不同質(zhì)量的顆粒樣品(或大分子)從混合液中分批沉降至管底，從而實(shí)現(xiàn)分離目的。

二、適用條件

該方法適用于混合樣品中各沉降系數(shù)差別較大的組分之間的分離，更準(zhǔn)確地說是沉降系數(shù)差別在1至幾個(gè)數(shù)量級的混合樣品的分離，差別越大，分離效果越好。

三、使用方法

差速離心法一般采用固定角轉(zhuǎn)子，通過較低速度的離心沉淀，極重的顆粒將全部沉到管底。繼續(xù)將上清液以更高的轉(zhuǎn)速沉淀，即可得到次重的顆粒樣品。逐步增加離心轉(zhuǎn)速，即可分別得到不同重量的樣品顆粒，以達(dá)到分離的目的。

通常為了得到較純的顆粒樣品，還需要將沉淀重懸，用相同的轉(zhuǎn)速再次沉淀。重復(fù)幾次之后即可得到大小基本均一的顆粒。

但是一般在實(shí)際使用中，差速離心通常不用于精細(xì)分離，僅用于s值相差1個(gè)數(shù)量級及以上的2種顆粒的分離，且沉淀不能實(shí)現(xiàn)*回收。

四、應(yīng)用范圍

差速離心技術(shù)的應(yīng)用十分普遍，尤其是針對有生物活性物質(zhì)的分離、粗提和濃縮，例如：

動植物病毒

各種亞細(xì)胞組分(細(xì)胞核、葉綠體、線粒體等)

核酸

蛋白質(zhì)，等

五、應(yīng)用實(shí)例

馬鈴薯線粒體的制備

取馬鈴薯塊莖200克，加入2.5倍體積的勻漿緩沖液，勻漿后用4層紗布過濾。濾液經(jīng)4000rpm離心10分鐘 ,收集上清液。

上清液13800×g(相對離心力RCF,即重力加速度g的倍數(shù))離心15分鐘收集沉淀，用緩沖液重懸并加入終濃度為15mmol/L的氯化鎂。

經(jīng)DNase I處理后，加入2倍體積的緩沖液，13800×g離心15分鐘收集沉淀，即為線粒體。