骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在誘導(dǎo)培養(yǎng)基的作用下，會(huì)逐漸向軟骨細(xì)胞方向分化,軟骨細(xì)胞外具有一層富含蛋白多糖的基質(zhì)，是成軟骨分化的標(biāo)志物，可被阿利辛藍(lán)染成藍(lán)綠色。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基適用于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)，能提高誘導(dǎo)效率。

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基

產(chǎn)品特點(diǎn)：

• 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基產(chǎn)品性能穩(wěn)定，可提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)效率;  
• 同時(shí)適用于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞平面誘導(dǎo)和三維誘導(dǎo); 
• 含染色液，方便使用；
• 即用型產(chǎn)品，開封即可使用，更省時(shí)省力。

（以下步驟僅供參考，詳情參見說明書）

1. 間充質(zhì)干細(xì)胞的準(zhǔn)備:

將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞消化下來計(jì)數(shù)，取3×105個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15mL離心管中，250g離心4min。

棄上清，加入0.5mL成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基基礎(chǔ)液，重懸細(xì)胞，150g離心5min。小心棄去上清，加入0.5mL成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)液，重懸細(xì)胞，150g離心5min。

將15mL離心管的管蓋稍稍旋開，放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)。

2. 細(xì)胞分化誘導(dǎo):

24h后觀察細(xì)胞沉淀形變團(tuán)聚的情況，如有明顯的變化，則小心輕柔地?fù)軇?dòng)管底，嘗試讓細(xì)胞團(tuán)脫離管底，全部浸潤(rùn)在誘導(dǎo)液中。

置于37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)約21天，通常每2天更換一次新鮮配制的成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)液。注意觀察細(xì)胞團(tuán)成球情況及表面光滑度，決定終止細(xì)胞誘導(dǎo)的時(shí)間，并進(jìn)行染色鑒定。

3. 染色鑒定

a)軟骨球固定：將軟骨球從離心管中轉(zhuǎn)移至EP管，并使用1×PBS清洗兩次，最后置于適量的4%中性中。

b)石蠟包埋切片：軟骨球經(jīng)石蠟包埋后切片。

c)阿利辛藍(lán)染色：將石蠟切片脫蠟，使用阿利辛藍(lán)染液染色30min，用自來水流水沖洗2min，蒸餾水沖洗1次。

d)誘導(dǎo)評(píng)估：顯微鏡下觀察成軟骨染色效果，并進(jìn)行圖像采集和誘導(dǎo)評(píng)估。誘導(dǎo)成功時(shí)，軟骨組織中的內(nèi)酸性粘多糖可被阿利辛藍(lán)染成藍(lán)綠色。

NOTE: 間充質(zhì)干細(xì)胞的成軟骨分化水平因細(xì)胞類型、細(xì)胞供體來源，培養(yǎng)條件、細(xì)胞代次、細(xì)胞狀態(tài)和分化時(shí)間等因素而異。

|  舉例說明：成軟骨誘導(dǎo)步驟（平面誘導(dǎo)）

（以下步驟僅供參考，詳情參見說明書）

1. 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞消化下來計(jì)數(shù)，成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基細(xì)胞重懸細(xì)胞，離心后調(diào)整細(xì)胞密度密度1-2.0×107cells/mL。

2. 20μL懸滴到24孔板。（20μL含有4×105細(xì)胞）。37℃培養(yǎng)3h使細(xì)胞貼壁。

3. 補(bǔ)充200uL誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基正常培養(yǎng)，每隔2-3天換液一次。按照以上換液頻率誘導(dǎo)21-28天，并注意觀察細(xì)胞形態(tài)變化。

4. 細(xì)胞固定：吸去培養(yǎng)基使用適量1×PBS清洗一次，棄去后取適量4%中性覆蓋培養(yǎng)器皿底面，室溫固定30-60min，棄去固定液再使用1×PBS清洗兩次。

5. 阿利新藍(lán)染色：向清洗干凈的誘導(dǎo)孔內(nèi)加入適量染色液，避光靜置染色30min。吸去阿利新藍(lán)染色液，用1×PBS清洗兩次，并加入適量1×PBS避免細(xì)胞干燥。

6. 誘導(dǎo)評(píng)估：顯微鏡下觀察成軟骨染色效果，并進(jìn)行圖像采集和誘導(dǎo)評(píng)估。誘導(dǎo)成功時(shí)，軟骨組織中的內(nèi)酸性粘多糖可被阿利辛藍(lán)染成藍(lán)綠色。

NOTE:間充質(zhì)干細(xì)胞的成軟骨分化水平因細(xì)胞類型、細(xì)胞供體來源，培養(yǎng)條件、細(xì)胞代次、細(xì)胞狀態(tài)和分化時(shí)間等因素而異。