懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑-QuickShuttle-Superfast 快速轉(zhuǎn)染試劑

QuickShuttle-Superfast 快速轉(zhuǎn)染試劑

貨號(hào)：KX0110043 

含量：0.8 ml 

用途：（1）用于大多數(shù)哺乳動(dòng)物貼壁細(xì)胞系的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建（立傳立轉(zhuǎn)）； 

           （2）用于大多數(shù)哺乳動(dòng)物懸浮細(xì)胞系的穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建。 

注意事項(xiàng)： 

1. 質(zhì)粒 DNA：請(qǐng)用能夠去除內(nèi)毒素的方法制備高質(zhì)量的質(zhì)粒 DNA。

 2. 稀釋液：0.85%（W/V）生理鹽水，用低內(nèi)毒素純水配制，高壓消毒或除菌過濾。

 3. 培養(yǎng)基：經(jīng)過 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常規(guī)培養(yǎng)基測(cè)試，推薦使用含 5~10%牛血清的 DMEM，若轉(zhuǎn)染效果不理想可嘗試其它培養(yǎng)基。 

4. 以 24 孔細(xì)胞板轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)為例，推薦每孔低內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 用量為 1~2µg、轉(zhuǎn)染試劑用量為 3~5µl， 請(qǐng)?jiān)谡綄?shí)驗(yàn)前根據(jù)不同細(xì)胞和不同培養(yǎng)基用報(bào)告基因進(jìn)行優(yōu)化。 

5. 對(duì)于大多數(shù)哺乳動(dòng)物貼壁細(xì)胞系，立傳立轉(zhuǎn)要求使用生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞，即細(xì)胞生長(zhǎng)至 80-90%成片或 剛長(zhǎng)滿。若使用生長(zhǎng)過老的細(xì)胞，將明顯影響立傳立轉(zhuǎn)的效率。 

6. 本品不推薦用于貼壁性較差的貼壁細(xì)胞系，如各種 293 細(xì)胞等。 

7. 本品對(duì)大多數(shù)哺乳動(dòng)物懸浮細(xì)胞系有一定轉(zhuǎn)染效率，可用于穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建。 

使用方法 ：

1. 將懸浮細(xì)胞或新鮮消化的貼壁細(xì)胞接種到 24 孔細(xì)胞板中，每孔 1~2×105細(xì)胞，1ml 培養(yǎng)基。

備 注：可在生長(zhǎng)旺盛的貼壁細(xì)胞傳代后直接按下述步驟 2~5 進(jìn)行轉(zhuǎn)染，無需 18~24 小時(shí)的等候時(shí)間。

 2. 將 1~2μg 質(zhì)粒 DNA 和 3~5μl 轉(zhuǎn)染試劑分別稀釋到 50μl 生理鹽水中。備注：質(zhì)粒 DNA 和轉(zhuǎn)染試劑的 量需要根據(jù)不同細(xì)胞和不同培養(yǎng)基來優(yōu)化，但理論上不超出 1~2µg 和 3~5µl 范圍。 

3. 合并上述兩溶液并混勻。備注：無需其它轉(zhuǎn)染試劑所需的 10~30 分鐘的等候時(shí)間。

4. 將上述復(fù)合物直接加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，用加樣器吸打混勻。

備注：轉(zhuǎn)染復(fù)合物可直接加入含血清的 細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。 

5. 將細(xì)胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

備注：無需在轉(zhuǎn)染后 4~6 小時(shí)補(bǔ)加血清或更換培養(yǎng) 基。

 6. 24~72 小時(shí)后根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)分析或穩(wěn)定細(xì)胞系加壓篩選。

備注：對(duì)于一些轉(zhuǎn)染效率高的 細(xì)胞系如 BHK-21 等，可在轉(zhuǎn)染后 24 小時(shí)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。