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碧云天細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

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更新時(shí)間:2023-03-16 12:44:10瀏覽次數(shù):681次

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碧云天細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(CellCycleandApoptosisAnalysisKit)是一種采用經(jīng)典的碘化丙啶染色(Propidiumstaining,即PIstaining)方法進(jìn)行細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡分析的檢測(cè)試劑盒。

碧云天細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒


產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱(chēng) 產(chǎn)品包裝
C1052 細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 50次


碧云天細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是一種采用經(jīng)典的碘化丙啶染色(Propidium staining,即PI staining)方法進(jìn)行細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡分析的檢測(cè)試劑盒。
碘化丙啶(Propidium,簡(jiǎn)稱(chēng)PI)是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光,并且熒光強(qiáng)度和雙鏈DNA的含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的DNA被碘化丙啶染色后,可以用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行DNA含量測(cè)定,然后根據(jù)DNA含量的分布情況,可以進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡分析。
碘化丙啶染色后,假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1,那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為2,正在進(jìn)行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1-2之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化(DNA fragmentation)導(dǎo)致部分基因組DNA片段在染色過(guò)程中丟失,因此凋亡細(xì)胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染,即熒光強(qiáng)度小于1,在流式檢測(cè)的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰,即凋亡細(xì)胞峰。
細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂,產(chǎn)生凋亡小體,使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細(xì)胞凋亡的早期,細(xì)胞對(duì)前向角光散射的能力顯著降低,對(duì)側(cè)向光散射的能力增加或沒(méi)有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期,前向和側(cè)向光散射的信號(hào)均降低。因此可通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞光散射的變化觀(guān)察細(xì)胞凋亡情況。
本試劑盒通常應(yīng)用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)。如果用于組織的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè),則必須把組織消化成單細(xì)胞狀態(tài),才可以進(jìn)行檢測(cè)。
本試劑盒足夠檢測(cè)50個(gè)樣品,每個(gè)樣品的細(xì)胞數(shù)量可以為10-100萬(wàn)。
包裝清單:

產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱(chēng) 包裝
C1052-1 染色緩沖液 25ml
C1052-2 碘化丙啶染色液(20X) 1.25ml
C1052-3 RNase A(50X) 0.5ml
說(shuō)明書(shū) 1份

保存條件:
-20℃保存,一年有效。C1052-2碘化丙啶染色液(20X)需避光保存。本試劑盒可4℃保存,一個(gè)月內(nèi)有效。


使用說(shuō)明:
1. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:
a. 對(duì)于貼壁細(xì)胞:小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用消化細(xì)胞,至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來(lái)時(shí),加
入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下所有的貼壁細(xì)胞,并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000g左右離心3-5分鐘,沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞,如果細(xì)胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細(xì)胞。加入約1毫升冰浴預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞,小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的PBS,以避免吸走細(xì)胞。輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞,避免細(xì)胞成團(tuán)。
b. 對(duì)于懸浮細(xì)胞:1000g左右離心3-5分鐘,沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞,如果細(xì)胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍
加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細(xì)胞。加入約1毫升冰浴預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞,小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的PBS,以避免吸走細(xì)胞。輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞,避免細(xì)胞成團(tuán)。
2. 細(xì)胞固定:加入1毫升冰浴預(yù)冷70%乙醇中,輕輕吹打混勻,4℃固定30分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間。通常固定2小時(shí)或以上更能保證染色效果,固定12-24小時(shí)可能效果更佳。1000g左右離心3-5分鐘,沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞,如果細(xì)胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的70%乙醇,以避免吸走細(xì)胞。加入約1毫升冰浴預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞。再次離心沉淀細(xì)胞,小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的PBS,以避免吸走細(xì)胞。輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞,避免細(xì)胞成團(tuán)。
3. 碘化丙啶染色液的配制:參考下表,根據(jù)待檢測(cè)樣品的數(shù)量配制適量的碘化丙啶染色液:


1個(gè)樣品 6個(gè)樣品 12個(gè)樣品
染色緩沖液 0.5ml 3ml 6ml
碘化丙啶染色液(20X) 25μl 150μl 300μl
RNase A(50X) 10μl 60μl 120μl
Final volume 0.535ml 3.21ml 6.42ml

注:配制好的碘化丙啶染色液短時(shí)間內(nèi)可以4℃保存,宜當(dāng)日使用。
4. 染色:每管細(xì)胞樣品中加入0.5毫升碘化丙啶染色液,緩慢并充分重懸細(xì)胞沉淀,37℃避光溫浴30分鐘。隨后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小時(shí)內(nèi)完成流式檢測(cè),能在當(dāng)日完成流式檢測(cè)。
5. 流式檢測(cè)和分析:用流式細(xì)胞儀在激發(fā)波長(zhǎng)488nm波長(zhǎng)處檢測(cè)紅色熒光,同時(shí)檢測(cè)光散射情況。采用適當(dāng)分析軟件進(jìn)行細(xì)胞
DNA含量分析和光散射分析。


細(xì)胞周期


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