碧云天BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒P0009 簡(jiǎn)介
碧云天BCA蛋白定量試劑盒P0009(增強(qiáng)型)(Enhanced BCA Protein Assay Kit)是根據(jù)常用的兩種蛋白濃度檢測(cè)方法之一BCA法研制而成，實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測(cè)定的簡(jiǎn)單、高穩(wěn)定性、高靈敏度和兼容性。
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品包裝 | 目錄價(jià) |
| P0009 | BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(增強(qiáng)型) | 5000次 | 1726.00元 |
| P0010 | BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(增強(qiáng)型) | 500次 | 375.00元 |
| P0010S | BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(增強(qiáng)型) | 200次 | 196.00元 |
BCA法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20、60、80。但本試劑盒受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無EGTA，二硫蘇糖醇(DTT)低于1mM，β-巰基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不適用BCA法時(shí)建議試用碧云天生產(chǎn)的Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P0006)。
圖1. BCA蛋白定量試劑盒蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的效果圖。左上圖為加入BCA工作液后37℃分別孵育30、60和120分鐘后的吸光度實(shí)測(cè)效果圖，右圖為37℃孵育60分鐘時(shí)的實(shí)拍顯色效果圖。圖中數(shù)據(jù)僅供參考，實(shí)際的檢測(cè)效果可能會(huì)略有不同。
BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(增強(qiáng)型)對(duì)樣品中各種物質(zhì)的詳細(xì)的兼容性和普通的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒相同， 每個(gè)試劑盒可以檢測(cè)5000個(gè)樣品。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| P0009-1 | BCA試劑 A | 500ml×2 |
| P0009-2 | BCA試劑 B | 30ml |
| P0009-3 | 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA) | 30mg×2 |
| P0009-4 | 蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液 | 5ml |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
室溫保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后-20℃凍存。
注意事項(xiàng)：
需酶標(biāo)儀一臺(tái)，測(cè)定波長(zhǎng)為540-595nm之間，562nm。需96孔板。如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定，但測(cè)定時(shí)，需根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積，適當(dāng)加大BCA工作液的用量使不小于最小檢測(cè)體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量可相應(yīng)按比例放大也可不變。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。
如發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景，請(qǐng)?jiān)囉帽淘铺焐a(chǎn)的 Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P0006)。
為了加快BCA法測(cè)定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱，但是切勿過熱。
EDTA濃度必須小于10mM，不兼容EGTA。不適用BCA法時(shí)，請(qǐng)?jiān)囉帽淘铺焐a(chǎn)的 Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P0006)。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
碧云天BCA蛋白定量試劑盒P0009使用說明：
1.蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備
a.取1.2ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到一管蛋白標(biāo)準(zhǔn)(30mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。配制后可立即使用，也可以-20℃長(zhǎng)期保存。
b.取適量25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，稀釋至終濃度為0.5mg/ml。例如取20μl 25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入980μl稀釋液即可配制成0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡(jiǎn)便起見，也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后的0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)可以-20℃長(zhǎng)期保存。
2.BCA工作液的配制
根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5mlBCA試劑A加100μl BCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
3.蛋白濃度檢測(cè)
a.將標(biāo)準(zhǔn)品按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20μl，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。
b.加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中。如果樣品不足20μl，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20μl。請(qǐng)注意記錄樣品體積。
c.各孔加入200μl BCA工作液，37℃放置20-30分鐘。
注: 也可以室溫放置2小時(shí)，或60℃放置30分鐘。BCA法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間。
d.用酶標(biāo)儀測(cè)定A562，或540-595nm之間的波長(zhǎng)的吸光度。
e.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和使用的樣品體積計(jì)算出樣品的蛋白濃度。
BCA蛋白定量實(shí)驗(yàn)中常見問題：
1.測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。
可能的原因是樣品中含有嚴(yán)重干擾BCA法測(cè)定蛋白濃度的物質(zhì)。
2.是否每次測(cè)定時(shí)都需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線？
建議每次測(cè)定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)锽CA法測(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度，否則如需精確測(cè)定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
相關(guān)產(chǎn)品：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| P0006 | Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒 | 1000次 |
| P0006C | Braford蛋白濃度測(cè)定試劑盒(去垢劑兼容型) | 800次 |
| P0007 | 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(5mg/ml BSA) | 1ml |
| P0009 | BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(增強(qiáng)型) | 5000次 |
| P0010 | BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(增強(qiáng)型) | 500次 |
| P0010S | BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(增強(qiáng)型) | 200次 |
| P0011 | BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒 | 5000次 |
| P0012 | BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒 | 500次 |
| P0012S | BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒 | 200次 |
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