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上海舒美超聲儀器有限公司

超聲功率對(duì)的酶活性與結(jié)構(gòu)變化的影響

時(shí)間:2022-1-16閱讀:60
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參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23527-2009測(cè)定蛋白酶活力,稍作修改。先將1%的酪蛋白溶液于40℃水浴5 min。加稀釋3.5倍的溶液0.5 mL,于40℃水浴2 min后,加1%的酪蛋白溶液0.5 mL,混勻,然后在40℃下水浴反應(yīng)10 min,結(jié)束后加入1.0 mL三??瞻紫燃尤偌永业鞍住lo置10 min,12000 r/min離心5 min,取濾液30 μL,碳酸鈉溶液150 μL,福林酚試劑30 μL,40℃恒溫20 min,680 nm下于酶標(biāo)儀測(cè)吸光值。每個(gè)樣品做3次平行。

量取溶液48 mL,將超聲波發(fā)生儀的探頭置于溶液中,探頭沒(méi)過(guò)溶液2 cm,不接觸溶液底部。超聲參數(shù):間歇比(s)3:3,超聲總時(shí)間5 min,超聲功率范圍(75~350 W),初始溫度控制為25℃。超聲預(yù)處理完畢后于4℃冰箱放置12 h,測(cè)其酶活、熱穩(wěn)定性、動(dòng)力學(xué)、熱力學(xué)、熒光光譜、紫外光譜和紅外光譜。

由于反應(yīng)物酪蛋白減少量不易測(cè)定,因此用產(chǎn)物生成量的變化來(lái)反映水解過(guò)程

活性隨超聲功率的變化曲線如圖1所示?;钚噪S著超聲功率的增加出現(xiàn)波動(dòng)現(xiàn)象。除了300 W和350 W時(shí),其余超聲功率對(duì)活性提高都有顯著差異。其中在250 W時(shí),活性,依次是125 W和175 W。酶活性比未超聲處理的酶活性依次提高26.9%,25.3%和22.2%。

注意:本次使用的超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)為昆山超聲儀器有限公司生產(chǎn)的昆山舒美KBS-150數(shù)控超聲細(xì)胞粉碎機(jī)。

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