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當(dāng)前位置:西安百螢生物科技有限公司>>trFluor™ 染料和試劑盒>>檢測(cè)試劑盒>> 23600Cell Meter™熒光細(xì)胞間隙連接檢測(cè)試劑盒

Cell Meter™熒光細(xì)胞間隙連接檢測(cè)試劑盒

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產(chǎn)品型號(hào)23600

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所  在  地西安市

更新時(shí)間:2024-05-06 16:47:36瀏覽次數(shù):282次

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Cell Meter™熒光細(xì)胞間隙連接檢測(cè)試劑盒 間隙連接是由連接蛋白構(gòu)成的專門的細(xì)胞間膜通道,可選擇性促進(jìn)<1.5 kD的小分子通過細(xì)胞。它們受電壓,生長(zhǎng)因子,cAMP和類維生suA的緊密調(diào)節(jié),并且受磷酸化調(diào)節(jié)。

間隙連接是由連接蛋白構(gòu)成的專門的細(xì)胞間膜通道,可選擇性促進(jìn)<1.5 kD的小分子通過細(xì)胞。它們受電壓,生長(zhǎng)因子,cAMP的緊密調(diào)節(jié),并且受磷酸化調(diào)節(jié)。Cell Meter™熒光細(xì)胞間隙連接檢測(cè)試劑盒為體外測(cè)定間隙連接功能提供了可靠而強(qiáng)大的檢測(cè)方法。該方法是非侵入性的。對(duì)研究中的細(xì)胞群進(jìn)行劃分,以使其中一小部分載有親脂性細(xì)胞質(zhì)膜可滲透染料Calcein UltraGreen™AM,當(dāng)細(xì)胞質(zhì)酯酶吸收細(xì)胞時(shí),該染料會(huì)水解,從而生成Calcein UltraGreen(一種高度熒光且保留良好的膜) -不可滲透的分子。另一部分是DiD,它是一種親脂性膜染料,在摻入膜時(shí)會(huì)橫向擴(kuò)散,使整個(gè)細(xì)胞膜染成深紅色熒光。將兩個(gè)部分混合并在共培養(yǎng)條件下孵育。鈣黃綠素UltraGreen通過間隙連接轉(zhuǎn)移到DiD染色的細(xì)胞中??梢酝ㄟ^熒光成像或流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。百螢生物為您提供優(yōu)質(zhì)的Cell Meter™熒光細(xì)胞間隙連接檢測(cè)試劑盒。

適用儀器


流式細(xì)胞儀
激發(fā):488 nm and 640 nm激光
發(fā)射:530/30 nm and 660/20 nm濾波片
通道:FITC和APC通道
熒光顯微鏡
激發(fā):FITC和Cy5濾波片組
發(fā)射:FITC和Cy5濾波片組
推薦孔板:黑色透明
實(shí)驗(yàn)方案

樣品分析方案

概述

將鈣黃綠素Ultragreen AM工作溶液添加到細(xì)胞中

將DiD工作溶液添加到細(xì)胞中

在37°C下孵育10-30分鐘

用GAP連接檢測(cè)緩沖液洗滌細(xì)胞

將細(xì)胞重懸于細(xì)胞培養(yǎng)基中并按1:1比例混合

使用帶有530/30 nm和660/20 nm發(fā)射濾光片的流式細(xì)胞儀或帶有FITC和Cy5濾光片組的熒光顯微鏡在不同時(shí)間檢測(cè)熒光信號(hào)


儲(chǔ)備溶液配制

1. Calcein Ultragreen AM儲(chǔ)備溶液
將50 µL DMSO(組分D)加入一個(gè)Calcein Ultragreen AM樣品瓶(組分A)中,并充分混合。
注意:將未使用的Calcein Ultragreen AM儲(chǔ)備溶液分裝在-20°C下,一次性使用,以免凍融循環(huán)。
注意:一個(gè)樣品瓶足以進(jìn)行50次測(cè)試。

2. DiD儲(chǔ)備溶液
將100 µL DMSO(組分D)加入DiD(組分B)中并充分混合。
注意:將未使用的DiD儲(chǔ)備溶液分裝在-20°C下,以單次使用,以免凍融循環(huán)。
工作溶液配制
1. Calcein Ultragreen AM工作溶液
將1 µL鈣黃綠素超綠AM儲(chǔ)備溶液添加到1 mL的GAP連接分析緩沖液中并充分混合。
注意:不宜儲(chǔ)存Calcein Ultragreen AM工作溶液,應(yīng)立即使用。
注意:1 mL Calcein Ultragreen AM工作溶液足以進(jìn)行兩次測(cè)試。

2. DiD工作溶液
將1 µL DiD儲(chǔ)備溶液加到1 mL GAP連接分析緩沖液中并充分混合。
注意:DiD工作溶液不宜存儲(chǔ),應(yīng)立即使用。
注意:1 mL DiD工作溶液足以進(jìn)行兩次測(cè)試。


操作步驟

以下協(xié)議可用作指導(dǎo),應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行優(yōu)化。
鈣黃綠素超綠AM的細(xì)胞染色
  1. 在6孔細(xì)胞培養(yǎng)板的細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞。

  2. 除去細(xì)胞培養(yǎng)基,并加入0.5 mL鈣黃綠素Ultragreen AM工作溶液。

  3. 在37°C下孵育細(xì)胞10-20分鐘。
    注意:應(yīng)為每個(gè)細(xì)胞系優(yōu)化孵育時(shí)間。

  4. 除去染料工作溶液,并用GAP連接分析緩沖液洗滌細(xì)胞。
    注意:對(duì)于貼壁細(xì)胞,請(qǐng)使用細(xì)胞橡膠刮板將細(xì)胞從板上分離下來。

  5. 在細(xì)胞培養(yǎng)基中重懸細(xì)胞。



DiD的細(xì)胞標(biāo)記
  1. 在6孔細(xì)胞培養(yǎng)板的細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞。

  2. 除去細(xì)胞培養(yǎng)基,并加入0.5 mL DiD工作溶液。

  3. 在37°C下孵育細(xì)胞10-20分鐘。
    注意:應(yīng)為每個(gè)細(xì)胞系優(yōu)化孵育時(shí)間。

  4. 除去染料工作溶液,并用GAP連接分析緩沖液洗滌細(xì)胞。
    注意:對(duì)于貼壁細(xì)胞,請(qǐng)使用細(xì)胞橡膠刮板將細(xì)胞從板上分離下來。

  5. 在細(xì)胞培養(yǎng)基中重懸細(xì)胞。



GAP連接測(cè)定
  1. 將鈣黃綠素染色的細(xì)胞和DiD標(biāo)記的細(xì)胞以1:1的比例混合,并鋪在孔中。
    注意:對(duì)于熒光顯微鏡,將每個(gè)50 µL加到96孔板的孔中并混合均勻。
    注意:對(duì)于流式細(xì)胞儀,將每一種加入500 µL到6孔板的孔中并混合均勻。

  2. 在37°C下孵育細(xì)胞2-3小時(shí)。

  3. 使用FITC和Cy5濾光片組通過熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞。

  4. 對(duì)于流式細(xì)胞儀分析:對(duì)于貼壁細(xì)胞,使用細(xì)胞橡膠刮板分離細(xì)胞。一旦細(xì)胞處于懸浮狀態(tài)或?qū)τ趹腋〖?xì)胞,請(qǐng)用DPBS或您選擇的緩沖液洗滌細(xì)胞兩次。將細(xì)胞重懸于HHBS(#20011)或DPBS或您選擇的緩沖液中,并使用530/30 nm濾光片(FITC通道)和660/20 nm濾光片(APC通道)檢測(cè)。




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