適用儀器

樣品實驗方案

簡要概述

1.準備密度為0.5-1×106細胞/ mL的細胞
2.在0.5 mL細胞懸液中加入1 µL 500X Amplite ROS Green
3.在37℃下將細胞染色1小時
4.處理細胞以誘導(dǎo)ROS
5.使用帶有FL1通道的流式細胞儀分析細胞（Ex / Em = 490/520 nm）

溶液配制

1.儲備溶液配制

       除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。

Amplite ROS綠色儲備溶液（500X）：將100 µL DMSO（組分C）添加到Amplite ROS Green（組分A）的小瓶中，并充分混合以制成500X Amplite ROS Green儲備液。 避光。 注意：要存放，請密封管。有關(guān)細胞樣品制備的指南，請點擊查看。

操作步驟

1.對于每個樣品，以0.5×105至1×106細胞/ mL的密度在0.5 mL測定緩沖液（組分B）或自備緩沖液中制備細胞。注意：應(yīng)單獨評估每個細胞系，以確定誘導(dǎo)ROS的細胞密度。

2.將1 µL 500X Amplite ROS Green儲備溶液加入0.5 mL細胞懸液中。

3.在37oC下孵育1小時。注意：對于貼壁細胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細胞以保持細胞完整，并在與Amplite ROS Green孵育之前用含血清的培養(yǎng)基洗滌細胞一次。合適的孵育時間取決于所用的單個細胞類型和測試化合物，優(yōu)化每個實驗的孵育時間。

4.通過在所需的緩沖液（例如PBS或HBSS）中添加50 µL 11X測試化合物來處理細胞。對于對照孔（未處的細胞），添加相應(yīng)量的緩沖液。

5.將細胞在37oC下孵育，以誘導(dǎo)ROS（避光）。注意：我們在37℃下用100 µM TBHP（氫過氧化叔丁基）處理Jurkat細胞30分鐘，以誘導(dǎo)ROS。有關(guān)詳細信息，請參見圖1。

6.使用具有FL1通道（Ex / Em = 490/520 nm）的流式細胞儀檢測熒光強度。