樣品實驗方案

簡要概述

1.帶有pH指示劑的染色細(xì)胞（例如：BCFL，AM）
2.用HH緩沖液洗滌細(xì)胞
3.準(zhǔn)備細(xì)胞內(nèi)pH校準(zhǔn)緩沖液
4.向細(xì)胞添加細(xì)胞內(nèi)pH校準(zhǔn)緩沖液
5.在37°C孵育10分鐘
6.使用適當(dāng)?shù)腅x / Em過濾器分析細(xì)胞

溶液配制

1.儲備溶液的制備

所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. Nigericin儲備溶液（10 mM）：
將276 µL DMSO（組分J）添加到小瓶尼日爾霉素（組分I）中，制成10 mM Nigericin儲備溶液。

2.工作溶液的制備

將1 µL 10mM Nigericin儲備溶液添加到1 mL標(biāo)準(zhǔn)pH緩沖液（組分A至組分H）中，制成細(xì)胞內(nèi)pH校準(zhǔn)緩沖液。

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樣品示例及操作

這是使用BCFL，AM pH指示劑校準(zhǔn)細(xì)胞內(nèi)pH的樣品實驗方案。

1.用BCFL，AM染色細(xì)胞：

1.1在DMSO溶液中制備5 mM BCFL，AM（Cat＃21190）。
1.2在HH緩沖液+ 0.02％PF127（Cat＃20053）中稀釋至5 µM。
1.3從細(xì)胞中去除生長培養(yǎng)基。
1.4加入100 µL BCFL，AM染色液。
1.5在37°C下孵育30分鐘。
1.6去除BCFL，AM染色溶液，并用HH Buffer洗滌一次。
1.7清空每個孔。

2.制作細(xì)胞內(nèi)pH標(biāo)準(zhǔn)曲線：

2.1向細(xì)胞中添加100 µL細(xì)胞內(nèi)pH校準(zhǔn)緩沖液。
2.2在37°C下孵育5-10分鐘。
2.3使用適當(dāng)?shù)腅x / Em過濾器分析細(xì)胞。 例如：BCFL，AM：Ex = 440、500nm，Em = 530nm。