操作步驟

準(zhǔn)備2-10 mMDMSO儲(chǔ)備溶液

對(duì)于＃22014添加45微升DMSO成50 μ 克小瓶使2mM的儲(chǔ)備溶液（1毫克/毫升，相當(dāng)于1.8毫摩爾）;

對(duì)于＃22015添加36微升DMSO成50 μ 克小瓶制成10mM儲(chǔ)備溶液（1毫克/毫升，相當(dāng)于1.46毫摩爾）;

對(duì)于＃22016，加入153μLDMSO以制備10mM儲(chǔ)備溶液（1mg / ml相當(dāng)于1.53mM）;

對(duì)于＃22017，加入215uL ml DMSO以制備10mM儲(chǔ)備溶液（1mg / ml相當(dāng)于2.15mM）;

對(duì)于＃22020，將4.2mg溶于1ml DMSO中以制備10mM儲(chǔ)備溶液（1mg / ml相當(dāng)于~2.4mM）;

注意：應(yīng)及時(shí)使用原液; 任何剩余的溶液應(yīng)等分并在< -20 o C冷凍。避免反復(fù)凍融循環(huán)，避免光照。

準(zhǔn)備染料工作溶液

在使用之前，通過(guò)用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液（pH7）稀釋來(lái)自步驟1的DMSO儲(chǔ)備溶液，制備1至20μM染料工作溶液。通過(guò)渦旋混合均勻。

用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡分析細(xì)胞：

3.1用測(cè)試化合物處理細(xì)胞一段所需的時(shí)間。

3.2離心細(xì)胞，每管2-10×10 5個(gè)細(xì)胞。

3.3將細(xì)胞重懸于500μL 染料工作溶液中（來(lái)自步驟2）。

3.4在室溫或37° C 下用染料溶液孵育細(xì)胞15至30分鐘，避光。

3.5從細(xì)胞中取出染料工作溶液，用HHBS或您選擇的緩沖液清洗細(xì)胞。將細(xì)胞重懸于500μL預(yù)熱的HHBS或培養(yǎng)基中，得到每管2-10×10 5個(gè)細(xì)胞。

3.6使用流式細(xì)胞儀（FL1通道） 或熒光顯微鏡監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490 / 520nm處的熒光變化。

注意：對(duì)于細(xì)菌細(xì)胞染色：當(dāng)通過(guò)測(cè)試細(xì)菌過(guò)夜生長(zhǎng)預(yù)處理的營(yíng)養(yǎng)肉湯中1：800稀釋儲(chǔ)備溶液時(shí)，染色是有效的，但也可以使用新鮮牛肉膏或PBS。細(xì)菌懸浮液應(yīng)用PBS稀釋至每毫升10 5 -10 7個(gè)生物?？梢酝ㄟ^(guò)將1ml溶液施加到.45μm過(guò)濾器（25mm）并真空過(guò)濾除去溶液，然后加入1ml染料溶液并在室溫下孵育5-10分鐘來(lái)染色細(xì)菌