樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1.用測試化合物（200μL/樣品）制備細(xì)胞
2.添加Apopxin Green檢測溶液
3.在室溫下孵育20-60分鐘
4.使用FL1通道的流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞（Ex / Em = 490/525 nm）

操作步驟

1.用測試化合物處理細(xì)胞一段所需的時(shí)間（用喜s堿處理的Jurkat細(xì)胞4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。注意：對粘附細(xì)胞的Apopxin 結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)分析不是常規(guī)檢測，因?yàn)樵诩?xì)胞分離或收獲期間可能發(fā)生特定的膜損傷。然而，Casiola-Rosen等人先前報(bào)道了利用膜聯(lián)蛋白V對貼壁細(xì)胞類型進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)的方法。

2.離心細(xì)胞，得到1-5×105個(gè)細(xì)胞/管。

3.將細(xì)胞重懸于200μL測定緩沖液（組分B）中。

4.將2μLApopxin Green（組分A）加入細(xì)胞中。

5.可選：將2μL100X碘化丙啶（組分C）加入細(xì)胞中，用于壞死細(xì)胞。

6.在室溫下孵育20至60分鐘，避光。

7.可選：在使用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞之前，添加200至300μL的測定緩沖液（組分B）以增加體積。

8.使用具有FL1通道的流式細(xì)胞儀（Ex / Em = 490 / 525nm）監(jiān)測熒光強(qiáng)度。當(dāng)?shù)饣ぜ尤爰?xì)胞時(shí)，使用FL2通道測量細(xì)胞活力。