OxiVision Green 過氧化氫（H2O2）檢測探針是美國AAT Bioquest生產的用于檢測過氧化氫的熒光探針，盡管H2O2對人類健康和疾病具有重要意義，但由于缺乏可用于活細胞的敏感和特異性H2O2檢測探針，其產生，積累，運輸和功能的分子機制尚未充分了解。目前可用的H2O2響應探針的局限性包括來自其他ROS的干擾背景熒光，對外部活化酶的需要，缺乏水溶性或相容性，和/或紫外區(qū)域中的激發(fā)譜。OxiVision Green 過氧化氫探針無熒光，在可見光區(qū)域無吸收。加入H2O2會引起迅速的熒光增加，伴隨著可見波長吸收帶的增長。由于其二元吸收/發(fā)射響應，該探針具有大的動態(tài)范圍。OxiVision Green 過氧化氫探針的熒光響應是H2O2選擇性的。與相似的ROS（如O2-，NO或-OCl）相比，OxiVision Green 過氧化氫探針對H2O2的選擇性> 100倍。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質的OxiVision Green 過氧化氫（H2O2）檢測探針。 注：該產品溶解需要60分鐘左右。檢測限：30-100μM。

操作步驟

1.準備OxiVision Green 過氧化氫：

1.1在高質量無水DMSO中制備2至5 mM OxiVision Green 過氧化氫儲備液。應及時使用原液; 任何剩余的溶液應等分并冷凍于-20℃.

注意：避免反復凍融循環(huán)。

1.2準備2X OxiVision Green 過氧化氫工作溶液：在實驗當天，將OxiVision Green 過氧化氫固體溶解在DMSO中，或將等份的原液溶解至室溫。在20 mM Hepes緩沖液或您選擇的緩沖液（pH 7）中制備濃度范圍為2至20μM的2X工作溶液。建議使用終濃度為5μM的OxiVision Green 過氧化氫測量溶液中H 2O 2濃度。

2.在上清液中運行H2 O 2測定：

2.1將50μL的2X OxiVision Green 過氧化氫工作溶液（來自步驟1.2）添加到H 2 O 2標準品，空白對照和測試樣品的每個孔中，使總 H 2 O 2測定體積為  100μL /好。

注意：對于384孔板中，添加樣品的25μL和25μL 2X OxiVision綠色 過氧化氫工作液到每個孔中。

2.2在室溫下孵育反應15至60分鐘，避光。

2.3用Ex / Em = 490 / 525nm 的熒光板讀數(shù)器監(jiān)測熒光增加。

2.4空白孔中的熒光（僅含測定緩沖液）用作對照，并從具有H 2 O 2反應的那些孔的值中減去。

3.在活細胞中運行H2 O 2測定：

OxiVision Green 過氧化氫可被動加載到活細胞中，并報告細胞內H 2 O 2濃度的微摩爾變化。以下是建議的顯微鏡成像方案，可根據(jù)您的具體研究需要進行修改。

3.1所述的OxiVision綠色過氧化氫的工作溶液應該作為步驟1.2來制備。

3.2根據(jù)需要處理細胞。

3.3用 OxiVision Green 過氧化氫工作溶液孵育細胞5到60分鐘。用PBS緩沖液洗滌細胞兩次。

3.4使用具有底部讀取模式的熒光酶標儀檢測Ex / Em = 490 / 525nm 處的熒光?；蛘呤褂肍ITC通道通過熒光顯微鏡檢查熒光變化。