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熒光探針

熒光淬滅劑標(biāo)記的亞磷酰胺

亞磷酰胺染料

染料標(biāo)記試劑

特殊氨基酸

抗體標(biāo)記: 等滲緩沖液

trFluor™ 染料和試劑盒: 比率檢測(cè)試劑盒檢測(cè)試劑盒細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)試劑盒

Tide Fluor™ 染料和試劑盒

iFluor™ 染料和試劑盒

Tide Quencher™ 染料

經(jīng)典淬滅劑

染料合成試劑

蛋白質(zhì)染料

花菁

其他染料: 染色試劑熒光標(biāo)記染料熒光染料

羅丹明

熒光素

*綴合物

膜電位檢測(cè)

β-淀粉樣蛋白分析

iFluor快速檢測(cè)

熒光成像

鏈霉抗*蛋白標(biāo)記物: 鏈霉親和素綴合物

熒光標(biāo)記的抗IgG抗體

*標(biāo)記的抗IgG抗體: 抗體標(biāo)記試劑盒

報(bào)告基因酶檢測(cè)

細(xì)胞信號(hào)

標(biāo)記細(xì)胞: 指示劑

陰離子

磷酸化蛋白

常用蛋白

RNA檢測(cè)

DNA檢測(cè)

轉(zhuǎn)移酶

蛋白激酶

肽酶和蛋白酶

磷酸二酯酶

氧化還原酶

辣根過氧化物酶

磷酸酶

核酸染料

檢測(cè)細(xì)菌試劑盒

緩沖液: 水溶液

抗淬滅封片劑

偶聯(lián)物

復(fù)合物

檢測(cè)線粒體

檢測(cè)細(xì)胞自噬的試劑盒

檢測(cè)葡萄糖試劑盒

鈣檢測(cè)

NAADP

抑制劑

Caspase的試劑

熒光底物

β半乳糖苷酶

反應(yīng)終止液

細(xì)胞培養(yǎng)液

成像試劑盒

轉(zhuǎn)染試劑

細(xì)胞增殖

香豆su

三磷酸

凝膠染料

分離試劑盒

校準(zhǔn)板

實(shí)驗(yàn)室耗材

終止子混合物

染色劑

單保護(hù)二胺

biotin

pH指示劑

鈣黃綠素

交聯(lián)劑

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封固液

溶液

檢測(cè)細(xì)胞

核苷酸

dUTP

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鈉鹽

馬來酰亞胺

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二氨基乙烷鹽酸鹽

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凝集素

OG

FAM

cy

iFluor

AF染料

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百螢課堂之Cy3酪胺的實(shí)驗(yàn)方案

時(shí)間：2024/11/14閱讀：59

Cy3酪胺（Cy3 tyramide），是一種用于熒光信號(hào)放大的探針，通過HRP和過氧化氫催化，標(biāo)記到抗體上。經(jīng)常有小伙伴問小螢Cy3酪胺的實(shí)驗(yàn)方案，那么，教程來啦，小螢手把手教您做實(shí)驗(yàn)！

一.百螢 Cy3酪胺(Cy3 tyramite)適用范圍

Cy3 酪胺（Cy3 tyramide）是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的Cy系列產(chǎn)品，該產(chǎn)品適合標(biāo)記抗體或蛋白,應(yīng)用于細(xì)胞或組織。

二.百螢 Cy3酪胺(Cy3 tyramite)優(yōu)勢(shì)

1.檢測(cè)靈敏度高；

2.熒光信號(hào)增強(qiáng)；

3.減少非特異性背景信號(hào)；

4.可以使用標(biāo)準(zhǔn)Cy3過濾器組輕松檢測(cè)。

三．百螢 Cy3酪胺(Cy3 tyramite)適用儀器

熒光顯微鏡

Ex:	Cy3/TRITC濾波片
Em:	Cy3/TRITC濾波片
推薦孔板：	黑色透明底板
濾波片：	Cy3/TRITC濾波片

Ex:

四．百螢 Cy3酪胺(Cy3 tyramite)實(shí)驗(yàn)方案

樣品染色示例

概述

1.固定/透化/阻斷細(xì)胞或組織

2.在封閉緩沖液中加入一抗

3.加入HRP標(biāo)記的二抗

4.準(zhǔn)備酪胺工作溶液，室溫下將其用于細(xì)胞或組織中5-10分鐘

溶液配置

儲(chǔ)備溶液配置

在沒有額外說明的情況下，所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融

制備儲(chǔ)備溶液（1000x）

加入適量的DMSO，制成1-5mM的酪胺儲(chǔ)備液。

注意：未使用的Tyramide原液可以在2-8℃下儲(chǔ)存

工作溶液配置

酪胺工作溶液（1X）

將1μLTyramide原液加入1 mL含有0.003％H2O2的緩沖液中。

注意：1.Tris Buffer，pH = 7.4合適。

2. Tyramide工作溶液即用即配。

實(shí)驗(yàn)方案

（本方案適用于細(xì)胞核組織染色）

細(xì)胞固定和透化

1. 在室溫下，用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定細(xì)胞或組織20分鐘。

2. 2.用PBS沖洗細(xì)胞或組織兩次。

3.在室溫下，用0.1％Triton X-100溶液使細(xì)胞透化1-5分鐘。

4.用PBS沖洗細(xì)胞或組織兩次。

注意：組織固定，脫蠟和再水化，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)IHC方案對(duì)組織進(jìn)行脫蠟和脫水。根據(jù)需要，使用優(yōu)選的特定溶液/方案進(jìn)行抗原修復(fù)。

過氧化物酶標(biāo)記

1.可選：將細(xì)胞或組織樣本置于過氧化物酶淬滅液（如3%過氧化氫）中孵育10分鐘，以淬滅內(nèi)源性過氧化物酶活性，然后在室溫下，用PBS沖洗兩次。

2.用封閉溶液（如含有1％BSA的PBS）在4℃下封閉30分鐘。

3.取出封閉溶液，加入稀釋好的一抗，在室溫下孵育60分鐘或在4°C下孵育過夜。

4.用PBS洗滌三次，每次5分鐘。

5.向每個(gè)樣品中加入100μL二抗-HRP工作溶液，在室溫下孵育60分鐘。

注意：孵育時(shí)間和濃度可根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度而變化。

6.用PBS洗滌三次，每次5分鐘。

酪胺標(biāo)記

1.準(zhǔn)備100μL 酪胺工作溶液，將其應(yīng)用于每個(gè)樣品，并在室溫下孵育5-10分鐘。

注意：如果您觀察到非特異性信號(hào)，可以縮短酪胺的孵育時(shí)間。您應(yīng)使用不同孵育時(shí)間點(diǎn)的陽性和陰性對(duì)照樣本，以優(yōu)化孵育期。或者您可以在工作溶液中使用較低濃度的酪胺。

2.用PBS沖洗三次

復(fù)染和熒光成像

1.根據(jù)需要，對(duì)細(xì)胞或組織樣本復(fù)染。 AAT提供了一系列細(xì)胞核復(fù)染試劑，如表1所列。按照試劑說明書進(jìn)行操作。

2.加上蓋玻片。

3.使用適當(dāng)?shù)臑V波器觀察酪胺標(biāo)記的信號(hào)。

表1.推薦用于核復(fù)染的產(chǎn)品

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百螢課堂之Cy3酪胺的實(shí)驗(yàn)方案

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