今天百螢為大家介紹一個(gè)非常實(shí)用的小技巧，用于確定熒光分子的亮度。如果你想選購一種熒光探針，而你已經(jīng)確切的了解到了幾種探針均可以滿足你的實(shí)驗(yàn)要求，但是，哪一個(gè)才是熒光強(qiáng)度好的呢？求人不如求己，實(shí)驗(yàn)還得靠自己！今天小螢告訴你之后，請(qǐng)收藏好它！

熒光分子的亮度取決于兩個(gè)因素：

1.消光系數(shù)（ε):熒光分子吸收特定波長的光的強(qiáng)度。

2.熒光量子產(chǎn)率（Φ）:吸收光轉(zhuǎn)換為發(fā)射光的效率。

有小伙伴要問了，知道了消光系數(shù)和熒光量子產(chǎn)率又該怎么辦呢？請(qǐng)記住以下公式：

亮度=消光系數(shù)（ε） x 熒光量子產(chǎn)率（Φ）

實(shí)例驗(yàn)證:大家對(duì)于PE、APC、Cy5應(yīng)該都是比較熟悉的。

·PE = 1,960,000 cm-1M-1 （ε)x 0.84（Φ） = 1646400

·APC = 700,000 cm-1M-1 （ε)x 0.68 （Φ）= 476000

·Cy5 = 250,000 cm-1M-1 （ε)x 0.20 （Φ）= 50000

現(xiàn)在相信大家不用我說，也能看出哪個(gè)更亮了吧！那有小伙伴又要問了，可是熒光探針那么多，我找不到確切的消光系數(shù)和熒光量子產(chǎn)量??！別著急，下面是我們?yōu)槟?/span>總結(jié)好的常用的產(chǎn)品消光系數(shù)和熒光量子產(chǎn)率請(qǐng)收好！

iFluor 350	20000	0.95	在水性緩沖液中（pH=7.2）
iFluor 405	37000	0.91
iFluor 430	40000	0.78
iFluor 450	40000	0.82
iFluor 488	75000	0.9
iFluor 514	80000	0.83
iFluor 532	90000	0.68
iFluor 546	100000	0.67
iFluor 555	100000	0.64
iFluor 560	120000	0.57
iFluor 568	100000	0.57
iFluor 594	180000	0.53
iFluor 610	110000	0.85
iFluor 633	250000	0.29
iFluor 647	250000	0.25
iFluor 660	250000	0.26
iFluor 670	250000	0.63
iFluor 680	220000	0.23
iFluor 700	220000	0.23
iFluor 750	275000	0.12
iFluor 790	250000	0.13
iFluor 800	250000	0.11
iFluor 810	250000	0.05
iFluor 820	250000	N/D
iFluor 840	200000	0.02	在PBS中
Alexa Fluor 488	73000	0.92	緩沖液（pH=7.2）
Alexa Fluor 532	81000	0.61
Alexa Fluor 546	112000	0.1
Alexa Fluor 568	88000	0.69
Alexa Fluor 594	92000	0.66
Alexa Fluor 647	270000	0.33
Alexa Fluor 660	132000	0.37
Alexa Fluor 680	183000	0.36
Alexa Fluor 700	205000	0.25
Alexa Fluor 750	290000	0.12
產(chǎn)品名稱	消光系數(shù)（ε）cm-1M-1	熒光量子產(chǎn)率（Φ）	備注
Cy3	150000	0.04
Cy3B	120000	0.58
Cy3B酸	120000	0.58
Cy5	250000	0.27(PBS)/0.4(乙醇)
Fluo-4	82000	0.16
Fluo-8	23430	0.16
Cal-590	78000	0.62
7-AAD	27500	0.02	在雙鏈DNA結(jié)合的情況下
AFC	17000	0.53	在乙醇中
Hoechst 33258	46000	0.034
SYTO 17	88000	0.964
SYTOX綠色	67000	0.53	在DNA中
JOJO-1	171000	0.44	在DNA中

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百螢課堂：如何確定熒光分子的亮度？

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