DNA定量是DNA樣品制備過(guò)程中的一項(xiàng)重要工作，Helixyte 綠色雙鏈DNA定量檢測(cè)試劑盒提供了一種用Helixyte Green BR快速測(cè)定dsDNA的方法。該測(cè)定法在三個(gè)數(shù)量級(jí)上是線(xiàn)性的，并且比紫外線(xiàn)吸收度讀數(shù)靈敏度高幾個(gè)數(shù)量級(jí)。Helixyte Green-BR與dsDNA結(jié)合后熒光增強(qiáng)，序列依賴(lài)性小，可準(zhǔn)確測(cè)定基因組DNA、病毒DNA、miniprep-DNA或PCR擴(kuò)增產(chǎn)物等多種來(lái)源的DNA樣品。該方法對(duì)RNA上的雙鏈DNA（dsDNA）具有高度的選擇性，并且被優(yōu)化以測(cè)量從10 pg/ul到10 ng/ul的DNA濃度。

適用儀器

熒光酶標(biāo)儀

Ex:490 nm

Em：530 nm

Cutoff：510 nm

推薦孔板:純黑色孔板

實(shí)驗(yàn)方案

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1. 準(zhǔn)備dSDNA標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)試樣品和染料工作溶液

2. 添加DNA標(biāo)準(zhǔn)液或測(cè)試樣品（50 uL）

3. 添加Helixyte Green-BR工作溶液（50 uL）

4. 在室溫下孵育2分鐘

5. 檢測(cè)Ex / Em = 490/530 nm的熒光強(qiáng)度

提示：操作前將所有組件加熱到室溫。暫時(shí)沒(méi)有關(guān)于Helixyte Green dsDNA染色劑的致突變性或毒性的數(shù)據(jù)。由于該試劑與核酸結(jié)合，因此應(yīng)將其視為潛在的誘變劑，應(yīng)謹(jǐn)慎處理。DMSO儲(chǔ)備溶液應(yīng)特別小心，因?yàn)橐阎狣MSO有助于有機(jī)分子進(jìn)入組織。

溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

將100 uL的100 ug / mL dsDNA標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分C）添加到400 uL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，以生成20 ug / mL的dsDNA標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后用測(cè)定緩沖液（組分B）進(jìn)行1：3的系列稀釋?zhuān)缘玫?至20 ug / mL的系列稀釋的dsDNA標(biāo)準(zhǔn)品。

工作溶液配制

Helixyte Green BR工作溶液：將50 uL Helixyte Green BR（組分A）添加到5 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，使總體積為5.050 mL。通過(guò)用箔紙覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵衼?lái)保護(hù)工作溶液免受光照。注意：我們建議在塑料容器中而不是玻璃中制備該溶液，因?yàn)槿玖峡赡軙?huì)吸附到玻璃表面。為了獲得結(jié)果，應(yīng)在準(zhǔn)備后的幾個(gè)小時(shí)內(nèi)使用此溶液。

實(shí)驗(yàn)步驟

表1. 在透明底部96孔微孔板中的dsDNA標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品的布局。DS = dsDNA標(biāo)準(zhǔn)品（DS1-DS7，20至0.027 ug / mL）; BL =空白對(duì)照；TS =測(cè)試樣品

BL	BL	TS	TS
DS1	DS1	…	…
DS2	DS2	…	…
DS3	DS3
DS4	DS4
DS5	DS5
DS6	DS6
DS7	DS7

表2. 每個(gè)孔的試劑組成

Well	Volume	Reagent
DS1-DS7	50 uL	連續(xù)稀釋 (20 to 0.027 ug/mL)
BL	50 uL	緩沖液 (Component B)
TS	50 uL	實(shí)驗(yàn)樣品

1. 根據(jù)表1和表2提供的布局，制備dsDNA標(biāo)準(zhǔn)品（DS）、空白對(duì)照品（BL）和測(cè)試樣品（TS）。對(duì)于384孔板，每孔使用25 uL試劑，而不是50 uL。注：根據(jù)需要處理細(xì)胞或組織樣本。

2. 添加50 uL Helixyte Green-BR染料工作液（2X）分別加入dsDNA標(biāo)準(zhǔn)液、空白對(duì)照液和供試品中，使總分析體積為100ul/孔。對(duì)于384孔板，添加25 uL的Helixyte Green-BR染料工作溶液，每孔總體積為50 uL/孔。

3. 在室溫下避光培養(yǎng)2分鐘。

4. 在Ex/Em=490/530 nm（截止=515nm）處用熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度。

圖示