百螢課堂之-細胞增殖實驗測定

時間：2023/11/8閱讀：112

細胞增殖測定是在細胞生物學和藥物發(fā)現(xiàn)研究中具有廣泛應(yīng)用價值的工具。它們通常用于評估正常細胞的健康狀況，對評估新型化療藥物的抗增殖效力和復(fù)合毒性至關(guān)重要。AAT Bioquest 提供了幾種評估細胞增殖的策略，這些策略基于跟蹤細胞分裂的世代或監(jiān)測細胞健康的關(guān)鍵參數(shù)，包括代謝活性、 DNA 合成或 ATP 濃度。從廣泛的傳統(tǒng)比色測定試劑中選擇用于確定細胞增殖的試劑，特別是四唑鹽，以及用于流式細胞術(shù)、成像和微孔板應(yīng)用的幾種高度敏感的基于熒光的測定方法。

一．細胞增殖的測定方法

測定細胞增殖準確的方法是在 DNA 復(fù)制過程中通過 BrdU摻入來測定新合成的 DNA。盡管這種方法具有高度的準確性和可重復(fù)性，但由于隨后用熒光抗 BrdU 抗體進行檢測是測量增殖所必需的，因此這種方法可能相當繁瑣?；蛘?，通過用 WST，resazurin 或細胞酯酶分離染料測量代謝活性的速率或用 CytoTellTM 染料或 CFSE 跟蹤細胞分裂的世代，可以更快地評估細胞增殖。最終，選擇適合的細胞增殖試驗主要取決于細胞類型，研究方案，以及希望研究的作用機制。

二．DNA合成細胞增殖實驗

原位測定新合成的 DNA 是鑒定增殖細胞可靠、精確的方法。實現(xiàn)這一點的方法是在細胞周期的 S 期將 BrdU細胞增殖檢測試劑 (17030)添加到新復(fù)制的 DNA 中。然后可以使用熒光標記的抗 BrdU 抗體來測量增殖的 BrdU 標記細胞。BrdU 染色適用于各種應(yīng)用，包括 IHC、 ICC 和 ELISA，并且可以用流式細胞術(shù)中適合的其他生物標志物進行染色。我們提供用 PE (V103305)標記的小鼠單克隆抗 BrdU 抗體克隆 Bu20a 和未標記的小鼠單克隆抗 BrdU 抗體克隆 Bu20a (V103300)和克隆 MoBu-1(V103295)的熒光綴合物，其可以用我們最亮和光穩(wěn)定的 iFluor系列染料標記。

點擊-化學驅(qū)動的 BucculiteTM XdU 細胞增殖測定

與 BrdU 測定不同，BucculiteTM XdU 細胞增殖測定不依賴于抗體來量化新生 DNA，也不需要 DNA 變性來促進 BrdU 標記核苷的抗體檢測。相反，BucculiteTM XdU 細胞增殖測定使用含炔的胸苷類似物 XdU 的專有混合物，其摻入到新合成的 DNA 中，隨后通過銅催化的疊氮化物-炔環(huán)加成檢測(即單擊反應(yīng)，圖1)。

細胞增殖測定原理。在 XdU 存在下的增殖細胞在 S 期加入了胸腺嘧啶堿基的化合物。熒光標記的疊氮化合物與摻入的 XdU 反應(yīng)，以便通過成像或流式細胞儀進行檢測(圖在 BioRender 中制作)。

由于點擊反應(yīng)利用雙正交部分檢測增殖細胞，背景干擾是小的。更重要的是，由于反應(yīng)條件溫和，Bucculite^TM XdU 細胞增殖測定法保留了細胞形態(tài)，抗原結(jié)合位點和樣品完整性，為用戶提供了用細胞周期染料，針對細胞表面標記物的抗體和熒光蛋白進行多重分析的機會。在 XdU 摻入后，點擊反應(yīng)和隨后的洗滌步驟可以在60分鐘內(nèi)完成，并且新生 DNA 可以使用標準成像系統(tǒng)或流式細胞儀進行定量。還提供環(huán)境安全的無銅 Bucculite^TM FdU 細胞增殖測定綠色，紅色和深紅色熒光。這些試劑盒利用我們的 Buccutte^TM 標記化學，以促進檢測新合成的 DNA 在活躍增殖的細胞。

用 Bucculite XdU 細胞增殖試驗檢測 IL 細胞增殖。使用 Bucculite XdU 細胞增殖 iFluor488成像試劑盒(22326)和 Bucculite XdU 細胞增殖 iFluor647成像試劑盒(22328)中提供的試劑和固定/檢測方案處理 HeLa 細胞。兩個樣本均用 Hoechst 33342核酸染色(17530)進行復(fù)染，并用熒光顯微鏡成像。

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號
Bucculite XdU細胞增殖熒光成像試劑盒“紅色熒光"	200Tests	22327
Bucculite XdU細胞增殖熒光成像試劑盒“綠色熒光"	200Tests	22326
Bucculite XdU細胞增殖熒光成像試劑盒“深紅色熒光"	200Tests	22328
Bucculite XdU細胞增殖檢測試劑盒“紅色熒光兼容"“流式細胞術(shù)"	100Tests	22325
Bucculite XdU細胞增殖檢測試劑盒“藍色激光兼容"“流式細胞術(shù)"	100Tests	22323
Bucculite FdU細胞增殖熒光成像試劑盒“紅色熒光"“無銅"	200Tests	22315
Bucculite FdU細胞增殖熒光成像試劑盒“綠色熒光"“無銅"	200Tests	22305
Bucculite FdU細胞增殖熒光成像試劑盒“深紅色熒光"“無銅"	200Tests	22320
BrUTP10mM溶于TE Buffer細胞增殖檢測	100ul	17032
BrdUTP10mM溶于TE Buffer細胞增殖檢測	100ul	17031

表1.可用于流式細胞術(shù)和增殖實驗的產(chǎn)品

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