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初級(jí)會(huì)員 | 第5年

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小螢課堂之轉(zhuǎn)移酶(Transferases)

時(shí)間:2023/10/23閱讀:181
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轉(zhuǎn)移酶是一類(lèi)催化特定官能團(tuán)(例如甲基或糖基)從供體分子轉(zhuǎn)移到受體分子的酶。它們參與無(wú)數(shù)重要的細(xì)胞過(guò)程,包括硫羥酸酯的轉(zhuǎn)移、色an酸的代謝和丙酮酸脫氫酶 (PDH) 的調(diào)節(jié)。轉(zhuǎn)移酶主要根據(jù)轉(zhuǎn)移的生化基團(tuán)的類(lèi)型進(jìn)行分類(lèi),共有10類(lèi),包括400多種的酶。

 

 

 

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常見(jiàn)的分類(lèi)包括:

甲基轉(zhuǎn)移酶和甲酰基轉(zhuǎn)移酶 - 轉(zhuǎn)移單碳基團(tuán)甲基 (-CH3) 和甲?;?(-CHO) 基團(tuán)的酶

轉(zhuǎn)酮酶和轉(zhuǎn)醛醇酶 - 轉(zhuǎn)移酮或醛基的酶

氧化氨基轉(zhuǎn)移酶或轉(zhuǎn)氨酶 - 轉(zhuǎn)移含氮基團(tuán)的酶

磺基轉(zhuǎn)移酶 - 轉(zhuǎn)移含硫基團(tuán)的酶

 

 

丙an酸氨基轉(zhuǎn)移酶

丙an酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT),也稱(chēng)為血清谷an酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(GPT),催化丙an酸和谷an酸之間α-氨基的可逆轉(zhuǎn)移,是氨基酸代謝中的重要酶。ALT 主要存在于肝臟以及心臟、肌肉和腎臟中,但含量要低得多。在健康受試者中,血清 ALT 水平相對(duì)較低。然而,當(dāng)細(xì)胞受損時(shí),例如在急性和慢性肝炎、阻塞性黃疸、肝癌、心肌梗塞期間,ALT 會(huì)泄漏到血流中,導(dǎo)致血清 ALT 水平增加。因此,血清ALT水平的檢查具有重要的臨床和診斷意義。

 

Amlite 熒光丙an酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)

Amlite 熒光丙an酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒(貨號(hào)13802)提供了一種快速、靈敏的方法來(lái)檢查各種生物樣品中的 ALT 濃度。通過(guò)酶偶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)產(chǎn)生紅色熒光產(chǎn)物來(lái)檢查產(chǎn)物谷an酸??梢允褂脽晒饷笜?biāo)儀在 Ex/Em = 530-570 / 590-600 nm( Ex/Em = 540 / 590 nm)讀取信號(hào)。使用 Amlite 熒光丙an酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒,在 100 µL 反應(yīng)體積中檢測(cè)到低至 4 mU/mL ALT。該測(cè)定是穩(wěn)定的,可以很容易地適應(yīng)各種應(yīng)用。

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1. 使用 Gemini 熒光酶標(biāo)儀在 96 孔黑色板中使用 Amlite 熒光丙an酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒(貨號(hào) 13802)檢查ALT 劑量反應(yīng)。

 

Part.2

 

 

Amlite 比色丙an酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)

也可以使用 Amlite 比色丙an酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒(貨號(hào) 13803)通過(guò)酶偶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物來(lái)檢測(cè)產(chǎn)物谷an酸。可以使用吸光度酶標(biāo)儀在 ~575 nm 或通過(guò) A570 nm A610 nm 的吸光度比讀取信號(hào),以提高檢測(cè)靈敏度。使用 Amlite 比色丙an酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒,可在 100 µL 反應(yīng)體積中檢測(cè)到低至 10 mU/mL ALT

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2. ALT 劑量反應(yīng)是使用 SpectraMax 酶標(biāo)儀(Molecular Devices)在 96 孔白色透明底板中使用 Amlite 比色丙an酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒(貨號(hào) 13803)進(jìn)行檢測(cè)。

 

 

Part.3

 

天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶

天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST),也稱(chēng)為血清谷an酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶(GOT),催化天冬氨酸和谷an酸之間α-氨基的可逆轉(zhuǎn)移,是氨基酸代謝中的重要酶。AST 主要存在于肝臟、心臟、肌肉、腎臟和大腦等組織中。在健康受試者中,血清 AST 水平相對(duì)較低。然而,當(dāng)細(xì)胞受損時(shí),例如在急性和慢性肝炎、阻塞性黃疸、肝癌、心肌梗塞期間,AST會(huì)泄漏到血流中,導(dǎo)致血清 AST 水平增加。因此,血清AST水平的檢測(cè)具有重要的臨床和診斷意義。

 

Amlite 熒光天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)

Amlite 熒光天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 (AST) 檢測(cè)試劑盒(貨號(hào) 13800)提供了一種快速、靈敏的方法來(lái)檢測(cè)各種生物樣品中的 AST 濃度。L-谷an酸產(chǎn)物是通過(guò)酶偶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)產(chǎn)生紅色熒光產(chǎn)物來(lái)檢測(cè)的。信號(hào)可由熒光酶標(biāo)儀在 Ex/Em = 530-570 / 590-600 nm(佳 Ex/Em = 540 / 590 nm)讀取。使用 Amlite 熒光天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒,100 µL 反應(yīng)體積中的 AST 低至 2 mU/mL。該檢測(cè)是穩(wěn)定的,可以很容易地適應(yīng)各種應(yīng)用。

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3. 使用 Gemini 熒光酶標(biāo)儀在 96 孔黑色板中使用 Amlite 熒光天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒(貨號(hào) 13800)檢測(cè)AST 劑量反應(yīng)。

 

Part.4

 

 

Amlite 比色天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)

也可以使用 Amlite 比色天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒(貨號(hào) 13801)通過(guò)酶偶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物來(lái)檢測(cè)產(chǎn)物谷an酸??梢允褂梦舛让笜?biāo)儀在 ~575 nm 或通過(guò) A570 nm A610 nm 的吸光度比讀取信號(hào),以提高檢測(cè)靈敏度。使用 Amlite 比色天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒,在 100 µL 反應(yīng)體積中檢測(cè)到低至 3 mU/mL AST。

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4. AST 劑量反應(yīng)是使用 SpectraMax 酶標(biāo)儀(Molecular Devices)在 96 孔白色、透明底板中使用 Amlite 比色天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒(貨號(hào) 13801)進(jìn)行檢測(cè)。

 

Part.5

 

HDAC 活性測(cè)定

組蛋白去乙?;?/span> (HDAC) 是一類(lèi)從組蛋白上的 ε-N-乙酰賴(lài)氨酸氨基酸中去除乙?;拿浮C撘阴W饔没謴?fù)賴(lài)氨酸的正電荷,從而增加組蛋白對(duì) DNA 帶負(fù)電荷的磷酸骨架的親和力。該過(guò)程通常通過(guò)阻斷轉(zhuǎn)錄因子的通路來(lái)下調(diào) DNA 轉(zhuǎn)錄。正在研究 HDAC 抑制劑作為癌癥的治療方法。

 

Amlite 熒光 HDAC 活性測(cè)定

Amlite 熒光 HDAC 活性檢測(cè)試劑盒(貨號(hào)13601)為檢測(cè) HDAC 活性提供了一種快速、方便且靈敏的方法。該試劑盒使用我們的非肽 HDAC Green 底物,該底物比傳統(tǒng)的基于肽的 HDAC 底物(如 Ac-RGK(Ac)-R110、Ac-RGK(Ac)-AMC Ac-RGK(Ac)-AFC)敏感得多 . 此外,HDAC Green 底物也比其他商業(yè)肽基 HDAC 底物更耐蛋白酶水解。我們的試劑盒可用于檢測(cè)細(xì)胞裂解物中的 HDAC 活性或使用細(xì)胞提取物或純化酶篩選 HDAC 抑制劑。HDAC Green 底物的長(zhǎng)波長(zhǎng)發(fā)射使分析較少受到化合物和細(xì)胞成分的干擾。HDAC 活性通過(guò) 490 nm 激發(fā)和 525 nm 發(fā)射進(jìn)行檢測(cè)。

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5. 使用 Amplite 熒光 HDAC 活性檢測(cè)試劑盒(藍(lán)色)分別與供應(yīng)商 X(紅色)和供應(yīng)商 Y(綠色)檢測(cè)HeLa 核提取物中的 HDAC 活性, 使用 Amlite 熒光 HDAC 活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)的 HDAC 活性的信號(hào)/背景比比供應(yīng)商 X Y 10 倍以上。

 

 

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