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產(chǎn)品基本信息
供應(yīng)商 ：AAT Bioquest
產(chǎn)品貨號 ：25450
儲存條件 ：在零下15度以下保存, 避免光照
產(chǎn)品規(guī)格 ：1 mg
產(chǎn)品參數(shù)：
Ex (nm)： 406 Em (nm)： 445
分子量 ： N/A 溶 劑： Water
產(chǎn)品物理化學(xué)光譜特性
吸收(nm) ：406
校正因子(260nm) ：0.338
校正因子(280nm) ：0.078
消光系數(shù)(cm-1M-1) ：350001
激發(fā)(nm) ：406
發(fā)射(nm) ：445
量子產(chǎn)額 ：0.811
產(chǎn)品概述
麥胚凝集素（WGA）是一種與N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸結(jié)合的凝集素。它是目前研究多、應(yīng)用廣泛的一類凝集素。WGA與糖綴合物結(jié)合，其衍生物和綴合物被廣泛用于標記細胞膜和纖維化瘢痕組織，用于熒光成像和分析。WGA的糖結(jié)合特異性與β-1,4-GlcNAc-連接殘基的序列，即幾丁質(zhì)酶有關(guān)。每個單體包含兩個相同的非相互作用的結(jié)合位點，它們與3或4β-1,4-GlcNAc單元互補。在所檢測的單糖中，只有GlcNAc與WGA結(jié)合。甘露聚糖不結(jié)合，而GalNAc只能弱結(jié)合。WGA與含有Galβ（1--4）GlcNAcβ（1--3）重復(fù)序列（即聚乳糖胺型聚糖）的大寡糖中的內(nèi)部GlcNAc殘基具有高親和力結(jié)合。N-乙酰神經(jīng)氨酸只參與與WGA的低親和力相互作用。WGA表現(xiàn)出了豐富的糖類特異性結(jié)合模式，可用于復(fù)雜碳水化合物的結(jié)構(gòu)分析。mFluor Violet 450 標記的 WGA 被紫激光充分激發(fā)，在 445 nm 處發(fā)出亮藍色熒光。mFluor Violet 450 WGA 綴合物保留了與唾液酸和 N-乙酰氨基葡萄糖殘基結(jié)合的能力，增強了其在熒光成像和各種科學(xué)研究分析中的實用性。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的mFluor Violet 450 WGA 綴合物。
適用儀器
熒光顯微鏡
激發(fā) ：406nm
發(fā)射 ：445nm
推薦孔板：黑色透明
實驗方案
樣品分析方案
溶液配制
儲備溶液配制
mFluor Violet 450 小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物儲備液 (200X)
將 500 µL ddH2O 添加到粉末小瓶中，制成 2 mg/mL 的儲備溶液。 注意：重新配制的綴合物溶液可在 2-8 °C 下短期儲存，或在 -20 °C 下長期儲存。
工作溶液配制
mFluor Violet 450-小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物工作溶液 (1X)
將 5 μL 200X WGA 儲備溶液添加到 1 mL HHBS 緩沖液中。
注意：不同細胞系的優(yōu)化染色濃度可能不同。 活細胞的推薦起始濃度為 5-10 µg/mL。
操作步驟
1.活細胞染色
1.1 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
1.2 添加 100 µL mFluor Violet 450-WGA 工作溶液。
1.3 將細胞與 WGA 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 分鐘。
1.4 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
1.5 使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。
2.固定細胞染色
2.1 在PBS中使用4％的甲醛固定細胞。
注意：對于固定細胞膜染色，建議在沒有透化步驟的情況下進行染色。固定后透化步驟會導(dǎo)致細胞內(nèi)區(qū)室染色，如高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng) (ER) 結(jié)構(gòu)染色。
2.2 添加 100 µL mFluor Violet 450-WGA 工作溶液。
2.3 在室溫下用 WGA 工作溶液孵育細胞 10-30 分鐘。
2.4 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
2.5 使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。
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