百螢課堂：CCK-8試劑盒相關(guān)問題與解答二

時間：2023/6/28閱讀：70

13.在實驗中OD值太高，怎么解決？

答：可以縮短加入CCK-8后的培養(yǎng)時間。例如：可以把加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間由2小時縮短為1小時。此外，可適當減少細胞的數(shù)量。

14.如果OD值太低，怎么解決？

答：可以采取2個辦法：1、適當增加細胞數(shù)量 2、延長加入CCK-8試劑后的反應(yīng)時間。

15.應(yīng)該每次做標準曲線嗎？

答：建議每次做。雖然細胞是一樣的，但是細胞的狀態(tài)不一定一樣。對于狀態(tài)不一樣的細胞，建議每次做標準曲線。

16.在cck-8顯色過程中，如何終止反應(yīng)

答:有以下幾種方法（96孔板）：

(1) 在顯色反應(yīng)后，將培養(yǎng)板放置4°冰箱內(nèi)；

(2) 每孔加入10ul 0.1M HCL溶液。

(3) 每孔加入10ul 1%（w/v）的SDS溶液。注：反應(yīng)停止后，應(yīng)在24h內(nèi)測定

17.如何減少由于CCK-8試劑在孔壁上的殘留所帶來的誤差

答：可以在加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑并混勻后加樣

18.好用的 CCK-8 試劑盒推薦？

答：百螢生物生產(chǎn)的 Cell Counting Kit-8（CCK-8）細胞活力檢測試劑盒已廣泛用于生物活性因子的活性檢測，抗腫瘤藥物的篩選，細胞增殖的測定，細胞毒性檢測以及藥敏等與細胞活性和增殖相關(guān)的實驗

19.如何使用CCK-8進行細胞增殖實驗？

答：通常，使用CCK-8進行細胞增殖實驗的步驟如下：

（1）將需要測定增殖能力的細胞均勻懸浮在培養(yǎng)基中，并將其分配到孔板或培養(yǎng)皿中。

（2）在每個孔中加入CCK-8試劑，并確保試劑均勻分布。

（3）將孔板或培養(yǎng)皿放回培養(yǎng)箱中，進行一定時間的培養(yǎng)，使細胞與試劑發(fā)生反應(yīng)。

（4）反應(yīng)結(jié)束后，使用吸光度計測量吸光度，并根據(jù)標準曲線或控制組進行數(shù)據(jù)分析，得出細胞增殖能力的相對值。

20.CCK-8試劑盒的優(yōu)點是什么？

答：（1）高靈敏度：CCK-8試劑可以對低細胞數(shù)進行檢測，因此對于罕見細胞或稀釋的細胞樣品非常有用。

（2）快速操作：CCK-8試劑盒提供了一種快速而簡便的方法來評估細胞的增殖情況，通常只需幾個小時即可得到結(jié)果。

（3）可行性高：CCK-8試劑盒對各種細胞類型都具有較好的適用性，可應(yīng)用于多種細胞培養(yǎng)條件和實驗設(shè)計。

21.有沒有CCK-8及與其他細胞增殖檢測試劑的特性對比？

答：圖中提供了多種用于檢測細胞增殖的方法、對比，供參考

22.CCK-8試劑盒是否有副作用？

答：CCK-8試劑盒是一種常用的細胞增殖檢測試劑，通常在細胞培養(yǎng)實驗中使用，并且已被廣泛驗證和接受。一般情況下，正確使用CCK-8試劑盒不會對細胞產(chǎn)生明顯的副作用。CCK-8試劑本身對細胞具有較低的毒性。它是一種水溶性試劑，主要由WST-8（水溶性四氧化三氮唑鹽）和電子媒介體1-Methoxy PMS（促進電子傳遞）組成。

在CCK-8試劑中，WST-8可被細胞內(nèi)的代謝活性還原為橙色的水溶性產(chǎn)物，該產(chǎn)物在細胞外可通過光學(xué)密度測量進行定量檢測。1-Methoxy PMS作為電子媒介體，促進WST-8的還原反應(yīng)。

當CCK-8試劑與細胞接觸時，其影響對細胞的影響主要來自WST-8的還原產(chǎn)物。在適當?shù)臐舛认?，CCK-8試劑對細胞的生長和代謝活性影響較小，并不會對細胞造成明顯的毒性。

然而，值得注意的是，對于特定的細胞類型或?qū)嶒灄l件，可能需要根據(jù)實際情況進行優(yōu)化和驗證。此外，在使用CCK-8試劑時，建議遵循相關(guān)的操作規(guī)程和安全指南，確保安全操作和正確解讀實驗結(jié)果。

23.CCK-8在實驗時，每孔應(yīng)該接種多少細胞？

答：針對標準96孔板，貼壁細胞的最小接種量為1000個/孔 (100μl培養(yǎng)基)。若為白細胞，接種量不低于2500個/孔 (100μl培養(yǎng)基)。如若使用24孔板或6孔板，應(yīng)預(yù)先計算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。

以上是百螢整理的CCK-8試劑盒的問題以及解答，大家可以做為參考。

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