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115次產(chǎn)品名稱:致瀉性大腸埃希氏菌五重 PCR 試劑盒產(chǎn)品規(guī)格:50T/盒
產(chǎn)品貨號:KLP08-A0231
產(chǎn)品簡介:
大腸埃希氏菌是一類能引起人體以腹瀉癥狀為主的病原菌,常見的致瀉大腸埃希氏菌主要包括腸道集聚 性 大 腸 埃 希 氏 菌( enteroaggregative Escherichia coli, EAEC )、 腸 道 致 病 性 大 腸 埃 希 氏 菌(enteropathogenic Escherichia coli, EPEC)、產(chǎn)志賀毒素大腸埃希氏菌(shiga toxin-producing Escherichia coli, STEC) (包括腸道出血性大腸埃希氏菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC))、產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)、腸道侵襲性大腸埃希氏菌(enteroinvasive Escherichia coli, EIEC)。該菌廣泛存在于自然界,當(dāng)其污染食品或水源后,可引起細(xì)菌性食物中毒或水源性腹瀉病爆發(fā)流行,所以致瀉大腸埃希氏菌的檢測對社會衛(wèi)生健康具有極大的意義。
為了滿足致瀉大腸埃希氏菌檢測及研究的需要,本公司根據(jù)標(biāo)準(zhǔn) GB4789. 6 合成了致瀉大腸埃希氏菌特征性基因特異性引物,并優(yōu)化形成本試劑盒。應(yīng)用本試劑盒進(jìn)行檢測具有快速、靈敏、特異、準(zhǔn)確、操作簡單等特點(diǎn)及優(yōu)點(diǎn)。
包裝規(guī)格及成分:
編號 | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 致瀉大腸埃希氏菌五重 PCR 反應(yīng)液 | 1 mL×1 管 |
試劑二 | 陽性對照 | 200 µL×1 管 |
試劑三 | 陰性對照 | 200 µL×1 管 |
使用說明書 | 1 份 |
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存。操作步驟:
一、樣本制備(參考 GB4789. 6)
固態(tài)或半固態(tài)樣品:固體或半固態(tài)樣品,以無菌操作稱取檢樣 25 g,加入裝有 225 mL 營養(yǎng)肉湯的均質(zhì)杯中,用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以 8000 r/min~10000 r/min 均質(zhì) 1 min~2 min,或加入裝有 225 mL 營養(yǎng)肉湯的均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器均質(zhì) 1 min~2
min 。
液態(tài)樣品:以無菌操作量取檢樣 25 mL,加入裝有 225 mL 營養(yǎng)肉湯的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)可預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠),振蕩混勻。
二、增菌
將 1 制備的樣品勻液于 36℃±1℃ 培養(yǎng) 6 h,取 10 μL ,接種于 30 mL 腸道菌增菌肉湯管內(nèi),于 42℃±1℃培養(yǎng) 18 h 。
三、分離
將增菌液劃線接種 MAC 和 EMB 瓊脂平板,于 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 18 h~24 h ,觀察菌落特征。在 MAC 瓊脂平板上,分解乳糖的典型菌落為磚紅色至桃紅色,不分解乳糖的菌落為無色或淡粉色;在 EMB 瓊脂平板上,分解乳糖的典型菌落為中心紫黑色帶或不帶金屬光澤,不分解乳糖的菌落為無色或淡粉色,應(yīng)挑取乳糖發(fā)酵,以及乳糖不發(fā)酵和遲緩發(fā)酵的菌落。
四、PCR 模板制備
五、試劑準(zhǔn)備
試劑 | 添加量(25 μL) |
致瀉大腸埃希氏菌五重 PCR 反應(yīng)液 | 20 μL |
DNA 樣品/陽性對照/陰性對照 | 5 μL |
六、PCR 檢測(在檢測區(qū)進(jìn)行) 請按照下表設(shè)置反應(yīng)程序:
階段 | 溫度設(shè)計(jì) | 循環(huán)數(shù) | ||
預(yù)變性 | 98℃ | 30 | sec | 1 × |
PCR 反 應(yīng) | 98℃ | 15 | sec |
30 × |
55℃ | 30 | sec | ||
68℃ | 10 | sec | ||
反應(yīng)結(jié)束后,將產(chǎn)物進(jìn)行 1.8%瓊脂糖凝膠電泳,電泳結(jié)束后分析其條帶情況。 |
【結(jié)果判定方法】結(jié)果判定
1) 陰性對照:無目的基因條帶
2) 陽性對照:有目的基因 Stx1(244 bp)和 sth(171 bp)的明顯條帶。
致瀉大腸埃希氏菌類別 | 陽性基因名稱 | 片段長度(bp) |
腸道聚集性大腸埃希氏菌(EAEC) | astA | 102 |
腸道致病性大腸埃希氏菌(EPEC) | escV | 544 |
產(chǎn)志賀毒素大腸埃希氏菌/腸道出血性大腸埃希 氏菌 (STEC / EHEC) | Stx1, escV+ Stx1 | 244 / 544+244 |
產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌(ETEC) | sth | 647 |
腸道侵襲性大腸埃希氏菌(EIEC) | ipaH | 171 |
注意事項(xiàng)
1. 開始檢測前請仔細(xì)閱讀本說明書,按要求操作。
2. 組織樣品的樣本處理和核酸擴(kuò)增應(yīng)注意生物安全
3. 試劑使用前,應(yīng)充分融化均勻后,瞬時(shí)離心;PCR 反應(yīng)管避免反復(fù)凍融。
4. 加樣時(shí)應(yīng)使樣品落入反應(yīng)液中,不應(yīng)有樣品黏附于管壁上,加樣后應(yīng)盡快壓緊管蓋。
5. 經(jīng)樣品前處理液處理過的樣本,不能用于樣本保存,僅用于即時(shí)檢測
6. 研磨組織樣本不宜過大,以防雜質(zhì)含量高而抑制后續(xù)的 PCR 反應(yīng)。
7. 樣品前處理液可置于 4℃保存。
8. 本產(chǎn)品只能用于科研實(shí)驗(yàn),不能用于臨床診斷。
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