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雙縮脲法蛋白含量測(cè)試盒操作過(guò)程：

一、粗酶液提?。?/p>

1.組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液。2.血清或培養(yǎng)液：直接測(cè)定。 3.細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。

二、測(cè)定操作： 1.分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到680nm，蒸餾水調(diào)零。2.試劑二、試劑三和試劑四置于30℃水浴保溫30min。 3.對(duì)照管：取一支EP管，加入100μL粗酶液，200μL試劑二，混勻后置于30℃水浴保溫10min；加入200μL試劑三，混勻后8000g，4℃離心10min；取200μL上清液，加入新的EP管，再加入1000μL試劑四，200μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測(cè)定光吸收，記為A對(duì)照管。 4.測(cè)定管：取一支EP管，加入100μL粗酶液，200μL試劑三，混勻后置于30℃水浴保溫10min；加入200μL試劑二，混勻后8000g，4℃離心10min；取200μL上清液，加入新的EP管，再加入1000μL試劑四，200μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測(cè)定光吸收，記為A測(cè)定管。（注意與空白管不同，先加試劑三，后加試劑二） 5.空白管：取EP管，加入200μL蒸餾水，1000μL試劑四，200μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測(cè)定光吸收，記為A空白管。 6.標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入200μL標(biāo)準(zhǔn)品，1000μL試劑四，200μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測(cè)定光吸收，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定一次。

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