品牌：茁彩生物

產品名稱：人真核翻譯起始因子2α(EIF2a)ELISA試劑盒

英文名稱：Human EIF2a ELISA KIT

檢測方法：雙抗體夾心法

種屬：人

檢測樣本：血清、血漿、組織、細胞上清或其他生物樣本

貼壁細胞裂解方法

單層貼壁細胞總蛋白的提取：

     1、倒掉培養(yǎng)液。

     2、每瓶細胞加5ml 4℃預冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放輕輕搖動1min洗滌細胞，然后棄去洗液。重復以上操作兩次，共洗細胞三次以洗去培養(yǎng)液。將PBS棄凈后把培養(yǎng)瓶置于冰上。

    3、按1ml裂解液加10 μl PMSF（100mM），搖勻置于冰上。（PMSF要搖勻至無結晶時才可與裂解液混合。）

    4、每瓶細胞加400 μ 含PMSF的裂解液，于冰上裂解30min，為使細胞充分裂解培養(yǎng)瓶要經常來回搖動。

    5、裂解完后，用干凈的刮棒將細胞刮于培養(yǎng)瓶的一側（動作要快），然后用槍將細胞碎片和裂解液移至1.5ml離心管中。（整個操作盡量在冰上進行。）

    6、于4℃下12000rpm離心5min。（提前開離心機預冷）

    7、將離心后的上清分裝轉移倒0.5min的離心管中放于－20℃保存。

懸浮細胞裂解方法

   1. 培養(yǎng)1×10⁶-1×10⁷個細胞；

   2. 將細胞轉移到15ml圓形離心管，4?C, 500g離心5min；

   3. 小心去除上清，加入5ml預冷PBS重懸細胞，4?C, 500g離心5min；

   4. 盡可能多的去除上清，小心不要碰到細胞沉淀。

   5. 在上步驟獲取的細胞中，加入200ul ProcartaPlex Cell Lysis Buffer。

   6. 吹吸混勻8-10次，冰上孵育5min；

   7. 將所有細胞轉移到1.5ml離心管；

   8. 4?C, 14000g（離心機大轉速）離心10min；

   9. 將上清轉移到新管中。該上清可立即用于檢測或者保存在-80?C。

  10. 按照多因子檢測試劑盒操作方法檢測。樣本孔加入25ul細胞裂解液和25ul Universal Assay Buffer。

可選步驟：

   建議細胞裂解后上清進行蛋白定量檢測。我們推薦使用Lowry法蛋白定量檢測。建議將所有樣本使用預冷的ProcartaPlex Cell Lysis Buffer調整樣本蛋白濃度方為4-8 mg/ml。