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液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

時(shí)間：2023-11-29閱讀：75
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　　原理
 
　　材料與儀器
 
　　尿樣
 
　　睪酮 表睪酮 雄酮 苯膽烷醇酮 DHEA 內(nèi)標(biāo)甲基睪酮標(biāo)準(zhǔn)品 甲醇 甲酸 乙酸銨 磷酸緩沖液 β-葡萄糖醛酸甙酶Et2 O
 
　　三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀 液相色譜系統(tǒng) 恒溫水浴鍋
 
　　步驟
 
　　1.樣品收集
 
　　2.樣品處理
 
　　取尿液210 mL于試管中，加入5 ng甲基睪酮(內(nèi)標(biāo))及210 mL pH6.8的磷酸緩沖液、150 μL β-葡萄糖醛酸甙酶(3 000 U)，于80℃恒溫水浴中培養(yǎng)3 h，取出后冷卻至室溫。再加入3.5 mLEt2 O，混旋，離心，取出有機(jī)相并于60℃水浴中揮干，殘?jiān)屑尤?00 μL 流動(dòng)相溶解，供LC-MS/MS分析。
 
　　3.色譜及質(zhì)譜條件
 
　　串聯(lián)質(zhì)譜：采用電噴霧電離源( ES I) ，在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM )正離子模式下掃描。碰撞氣(CAD )壓力為48 263 Pa；氣簾氣(CUR)壓力為68 948 Pa；霧化氣(GS1)壓力為241 317 Pa；輔助加熱氣(GS2)壓力為275 790 Pa。噴霧電壓為5 500 V；離子化溫度( TEM )為500 ℃。
 
　　選取各目標(biāo)物的兩組特征母離子 /子離子對(duì) ,分別優(yōu)選其最佳碰撞電壓 (CE)和去簇電壓 (D P ) 。并采用豐度較強(qiáng)的一組母離子 /子離子對(duì)進(jìn)行定量分析。
 
　　注意事項(xiàng)
 
　　1. 液相色譜分離條件的優(yōu)化是本研究的關(guān)鍵。睪酮與表睪酮、雄酮與苯膽烷醇酮均為同分異構(gòu)體 ,具有相同的母離子和子離子 ,必須依靠色譜方法進(jìn)行分離。
 
　　2. 每個(gè)目標(biāo)物選取低、中、高 3種濃度的樣品 ,以3種濃度樣品與對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定結(jié)果相比求得回收率 ,并考察方法的精密度、準(zhǔn)確度。
 

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