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    上海西格生物科技有限公司
    初級(jí)會(huì)員 | 第6年

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    天花病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

    參  考  價(jià)面議
    具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

    產(chǎn)品型號(hào)50T

    品       牌其他品牌

    廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

    所  在  地上海市

    更新時(shí)間:2020-10-15 13:10:04瀏覽次數(shù):139次

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    天花病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
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    野漆樹(shù)苷
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    注意事項(xiàng):
    1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織,若為冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。

    2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
    3. 電泳檢測(cè)時(shí),切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
    4. 建議擴(kuò)增片段長(zhǎng)度1 kb以內(nèi),以便擴(kuò)增效率佳。
    5. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

    客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱(chēng)即可。由我們提取RNA,設(shè)計(jì)并合成引物,完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

    產(chǎn)品名稱(chēng)

     天花病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

     英文名稱(chēng)

     Variola Virus(VARV)

     貨號(hào)

     XG01P4231

    產(chǎn)品特點(diǎn):
    靈敏度高:可檢測(cè)個(gè)位拷貝數(shù)的基因
    特異性高:有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
    穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
    擴(kuò)增性能優(yōu):擴(kuò)增效率高,熒光信號(hào)強(qiáng)

     

    樣品RNA的抽提:

    ①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
    ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
    ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
    ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
    ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
    2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
    1)紫外吸收法測(cè)定
    先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋?zhuān)?:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
    ① 濃度測(cè)定
    A260下讀值為1表示40 ?g RNA/ml。樣品RNA濃度(?g/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 ?g/ml。

    樣品cDNA合成:
    ①反應(yīng)體系
    序號(hào)  反應(yīng)物  劑量
    1  逆轉(zhuǎn)錄buffer  2μl
    2  上游引物  0.2μl
    3  下游引物  0.2μl
    4 dNTP  0.1μl
    5  逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV  0.5μl
    6  DEPC水  5μl
    7  RNA模版  2μl
    8  總體積  10μl
    輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
    ②混合液在加入逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV 之前先70℃干浴3分鐘,取出后立即冰水浴至管內(nèi)外溫度一致,然后加逆轉(zhuǎn)錄酶0.5μl,37℃水浴60分鐘。
    ③取出后立即95℃干浴3分鐘,得到逆轉(zhuǎn)錄終溶液即為cDNA溶液,保存于-80℃待用。
    具體計(jì)算如下:
    RNA溶于40 ?l DEPC水中,取5ul,1:100稀釋至495?l的TE中,測(cè)得A260 = 0.21
    RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 ?g/ml = 840 ?g/ml 或 0.84 ?g/?l
    取5ul用來(lái)測(cè)量以后,剩余樣品RNA為35 ?l,剩余RNA總量為:35 ?l × 0.84 ?g/?l = 29.4 ?g
    ②純度檢測(cè)
    RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值范圍1.8到2.1。
    2)變性瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定
    ①制膠
    1g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% (12.3 M)。10×MOPS電泳緩沖液
    濃度  成分
    0.4M  MOPS,pH 7.0
    0.1M  乙酸鈉
    01M  EDTA
    灌制凝膠板,預(yù)留加樣孔至少可以加入25 ?l溶液。膠凝后取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內(nèi),加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個(gè)毫米。
    ②準(zhǔn)備RNA樣品
    取3?gRNA,加3倍體積的甲醛上樣染液,加EB于甲醛上樣染液中至終濃度為10?g/ml。加熱至70℃孵育15分鐘使樣品變性。
    ③電泳
    上樣前凝膠須預(yù)電泳5min,隨后將樣品加入上樣孔。5-6V/cm電壓下2h,電泳至溴酚蘭指示劑進(jìn)膠至少2-3cm。
    ④紫外透射光下觀察并拍照
    28S和18S核糖體RNA的帶非常亮而濃(其大小決定于用于抽提RNA的物種類(lèi)型),上面一條帶的密度大約是下面一條帶的2倍。還有可能觀察到一個(gè)更小稍微擴(kuò)散的帶,它由低分子量的RNA(tRNA和5S核糖體RNA)組成。在18S和28S核糖體帶之間可以看到一片彌散的EB染色物質(zhì),可能是由mRNA和其它異型RNA組成。RNA制備過(guò)程中如果出現(xiàn)DNA污染,將會(huì)在28S核糖體RNA帶的上面出現(xiàn),即更高分子量的彌散遷移物質(zhì)或者帶,RNA的降解表現(xiàn)為核糖體RNA帶的彌散。用數(shù)碼照相機(jī)拍下電泳結(jié)果。

    熱帶假絲酵母 Candida tropicalis

    貓腎細(xì)胞英文名稱(chēng):F81

    刺毛鼠肺成纖維樣細(xì)胞英文名稱(chēng):CWbRL

    草魚(yú)胚胎細(xì)胞英文名稱(chēng):CP-88

    中國(guó)倉(cāng)鼠肺成纖維樣細(xì)胞英文名稱(chēng):CHL-Don

    人卵巢細(xì)胞英文名稱(chēng):COC1

    CHO(倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

    甲狀腺過(guò)氧化物酶(TPO)重組蛋白英文名稱(chēng):Recombinant Thyroid Peroxidase (TPO)

    Skirrow瓊脂配套試劑 規(guī)格: 10支/盒 用途: 每支添加于100mL的 Skirrow瓊脂基礎(chǔ)中

    大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

    YM11瓊脂/YM11 Agar濾膜法用于霉菌、酵母菌的分離培養(yǎng)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

    游離測(cè)定培養(yǎng)基/Free Biotin Assay Medium嬰兒食品和粉中游離測(cè)定250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

    人腎透明細(xì)胞腺細(xì)胞英文名稱(chēng):786-0
    天花病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒三(三苯基膦)羰基化銠(I)

    三(三苯基膦)羰基化銠(I)

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    鹽巴馬汀

    鹽巴馬汀

    鹽巴馬汀

    對(duì)羥基苯乙酰

    對(duì)羥基苯乙酰

    對(duì)羥基苯乙酰

    (S)-(+)-扁桃

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