PCR特異性：
1.primers design
這是重要的一步。理想的，只同目的序列兩側(cè)的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些條件：
1)足夠長，18～24bp，以保證特異性，當然，不是說越長越好，太長的primer同樣會降低特異性，并且降低產(chǎn)量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中間序列要多GC，以增加穩(wěn)定性；
4)避免3'端GCrich，個BASE不要有GC，或者5個有3個不要是GC。
5)避免3'端的互補，否則，容易造成DIMER；
6)避免3'端的錯配；
7)避免內(nèi)部形成二級結(jié)構(gòu)；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值時不算，但在檢測互補和二級結(jié)構(gòu)要加上它們；
9)使用兼并primer時，要參考密碼子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用較高的primer濃度(1μM～3μM)；
10)學(xué)會使用一種design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。

產(chǎn)品名稱：恙蟲病東方體探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Orientia tsutsugamushi
貨號：XG01P3916
分類：熒光定量PCR試劑盒
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。

熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
實時定量PCR：
①β-actin陽性模板的標準梯度制備 陽性模板的濃度為1011，反應(yīng)前取3μl按10倍稀釋（加水27μl并充分混勻）為1010，依次稀釋至109、108、107、106、105、104，以備用。
②反應(yīng)體系如下：
標準品反應(yīng)體系
序號  反應(yīng)物  劑量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  陽性模板上游引物F  0.5μl
3  陽性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  陽性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。

2216E瓊脂/2216E Agar用于海生菌試驗250克國產(chǎn)/進口

大鼠腎小球內(nèi)細胞*培養(yǎng)基100mL

CAL-27(人舌鱗細胞)5×106cells/瓶×2

A7r5(大鼠胸大動脈平滑肌細胞)5×106cells/瓶×2

淋巴白血病英文名稱：L1210瘤

MDA-MB-157(人腺細胞)5×106cells/瓶×2

CHO, 中國倉鼠卵巢細胞系

人間充質(zhì)干細胞-臍帶

吲哚培養(yǎng)基/靛基質(zhì)培養(yǎng)基/肉湯/培養(yǎng)基/Indole Medium細菌靛基質(zhì)試驗250克國產(chǎn)/進口

HCG803/胃細胞株國產(chǎn)

人腺細胞英文名稱：MDA-MB-231

hFOB 1.19(SV40轉(zhuǎn)染人成骨細胞)5×106cells/瓶×2

麥康凱瓊脂3號/麥康克瓊脂3號/Maconkey Agar No.3用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)（OXOID方法）250克國產(chǎn)/進口
恙蟲病東方體探針法熒光定量PCR試劑盒人胃內(nèi)因子(GIF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2mg

其他白細胞介

異歐前胡 訂購|咨詢  20mg 造血干細胞特異性相關(guān)結(jié)合蛋白1體 PANK4 ELISA Kit 泛激酶4(PANK4)ELISA試盒

人P62抗體(AP62A)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒25g

小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞*培養(yǎng)00mL 9005805化學(xué)試R脊椎蛋白4(RSPO4)檢測試盒(酶免疫吸附試驗法)

聚 訂購|咨詢 00mg 天門冬酰連接糖化11體 TRIM28/KAP1/RNF96/TIF1B ELISA Kit 轉(zhuǎn)錄中介因子1β(TRIM28/KAP1/RNF96/TIF1B)ELISA試盒

人C4結(jié)合蛋白β(C4BPβ)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒0G

9005805化學(xué)試硫氧還蛋白1(SRXN1)檢測試盒(酶免疫吸附試驗法)

東莨菪內(nèi)酯 訂購|咨詢  20mg 化KB抑制蛋白激酶β體 DR1 ELISA Kit TBP結(jié)合轉(zhuǎn)錄向下調(diào)節(jié)因子1(DR1)ELISA試盒

基因反應(yīng)體系：
序號  反應(yīng)物  劑量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  內(nèi)參照上游引物F  0.5μl
3  內(nèi)參照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待測樣品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。
③制備好的陽性標準品和檢測樣本同時上機，反應(yīng)條件為：93℃　2分鐘，然后93℃ 1分鐘，55℃ 2分鐘，共40個循環(huán)。