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廣州潔特生物過濾股份有限公司


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重組蛋白A/G預(yù)裝柱/填料

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)0

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更新時間:2022-09-07 13:13:54瀏覽次數(shù):211次

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經(jīng)營模式:

商鋪產(chǎn)品:42條

所在地區(qū):

聯(lián)系人:張 (銷售)

產(chǎn)品簡介

通過基因重組技術(shù),將蛋白A與蛋白G基因重組于同一質(zhì)粒載體中,并在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá),得到分子量為50.5KDa的可溶性蛋白A/G。該可溶性蛋白A/G具有四個IgG結(jié)合位點,來自于蛋白A;和兩個IgG的結(jié)合位點,來自于蛋白G。因具有上述特性,使得基因工程重組蛋白A/G具有廣泛的IgG的結(jié)合能力,對各種哺乳類動物的IgG都能結(jié)合,使得該產(chǎn)品在IgG的診斷和純化中具有十分廣泛的用途。本產(chǎn)品采用“高配基、......

詳細(xì)介紹

l 產(chǎn)品技術(shù)指標(biāo)

    rec-Protein A/G per Sepharose 4FF 比值:4.0-4.5mg rec-Protein A/G per ml Sepharose 4FF

    rec-Protein AG分子量:50.5 KDa

    每分子rec-Protein G可結(jié)合IgG位點數(shù):6個(4個來自于蛋白A,2個來自于蛋白G)

    rec-Protein A可結(jié)合白蛋白位點數(shù):無

    線性流速:300-500 cm/h

   耐壓指數(shù):≤0.3 MPa(填料)

l 注意事項
請在實驗前仔細(xì)閱讀本rProtein A預(yù)裝柱使用說明。同時,將所要的所有試劑、耗材拿出置于室溫,恢復(fù)至室溫使用。


l  產(chǎn)品保存
產(chǎn)品儲存于2-8℃,保質(zhì)期兩年。

l  rProtein A/G-Sepharose 4FF純化IgG抗體步驟

以下方法適用于從血清或腹水中純化IgG抗體,不同來源的IgG與rProteinA/ G的結(jié)合能力不同,具體情況請參考表1。

1. 將血清或腹水樣品(推薦上樣量2 mL樣品/mL柱)裝入截留分子量3.5 KDa透析帶中,于4 ℃冰箱中對1× PBS(pH 7.4)透析過夜;

2. 將rProtein A/G-Sepharose 4FF裝柱固定好,用10倍柱體積1× PBS(pH 7.4)平衡層析柱,建議流速為1 mL/min;

3. 將透析好的樣品從層析柱上端加入,建議流速為1 mL/min,為了獲得更好的抗體結(jié)合效果可將流穿液再上樣,重復(fù)2遍(或者是將樣品1次性加入層析柱后置于搖床上,輕輕搖動,結(jié)合30 min);

4. 樣品結(jié)合后,用20倍柱體積1× PBS(pH 7.4)洗滌層析柱,建議流速為1 mL/min,勿讓層析柱滴干;

5. 洗脫IgG,向?qū)游鲋隙思尤胂疵撘海?00 mM,pH 2.7),用預(yù)先加有100 μL中和緩沖液(1M Tris,pH 9.0)的4 mL Ep管接收,2 mL /管,共收集10倍柱體積,進(jìn)行10 % SDS-PAGE電泳,確定IgG樣品所在管,回收樣品。

6. 加入5倍柱體積再生緩沖液(100 mM,pH 2.0),再加入10倍柱體積ddH2O清洗層析柱。 向?qū)游鲋尤?0倍柱體積, 20% Ethanol,于4~8 ℃冰箱。

表1 rProtein A/G 與Ig結(jié)合能力情況

IgG類型

Protein A

Protein G

IgG類型

Protein A

Protein G

人 IgG1

++++

++++

大鼠 IgG2b

-

++

人 IgG2

++++

++++

大鼠 IgG2c

+

++

人IgG3

-

++++

大鼠 IgM

+/-

-

人IgG4

++++

++++

兔 Ig

++++

+++

人IgA

++

-

雞 Ig

-

+

人n IgD

++

-

倉鼠 Ig

+

++

人IgE

++

-

豚鼠 Ig

++++

++

人 IgM

++

-

牛 Ig

++

++++

小鼠 IgG1

+

++++

++

++++

小鼠 IgG2a

++++

++++

奶牛

++

++++

小鼠 IgG2b

+++

+++

+++

+++

小鼠 IgG3

++

+++

綿羊

+/-

++

小鼠 IgM

+/-

-

山羊

-

++

大鼠 IgG1

-

+

大鼠 IgG2a

-

++++


表2 rProtein A/G預(yù)裝柱系列產(chǎn)品參數(shù)

特性

rProtein A/G

特性

rProtein A

柱體積規(guī)格

1mL,5mL

填料穩(wěn)定性

>20純化周期

基質(zhì)組成

4%高交聯(lián)度瓊脂糖

pH穩(wěn)定性

pH 2~11

基質(zhì)平均粒徑

90μm

推薦工作pH范圍

pH 3~10

功能基團(tuán)

rProtein A/G:50.5kDa;

IgG結(jié)合位點:6個

推薦在位清洗pH范圍

pH 2~11

配基密度

≈3mg rProtein A/mL 基質(zhì)

工作溫度

4~40℃

結(jié)合能力

35-50mg人IgG/mL填料

運(yùn)輸條件

20%乙醇浸泡,室溫運(yùn)輸

推薦流速

30~150cm/mL

貯藏條件

20%乙醇條件下,

4~8℃保存

關(guān)鍵詞:層析柱
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