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重組蛋白A預(yù)裝柱/填料

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廣州潔特生物過(guò)濾股份有限公司

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

蛋白A可與多數(shù)哺乳動(dòng)物IgG的Fc端特異性結(jié)合。使用的rec-Protein A是通過(guò)基因工程-重組蛋白的方法表達(dá)獲得。由于重組表達(dá)的rec-Protein A去除了除Fc端以外的其他非特異性結(jié)合位點(diǎn)，特異性更好。本產(chǎn)品采用“高配基、高濃度、小體積"的創(chuàng)新偶聯(lián)技術(shù)，將填料中有限的羥基(-OH)結(jié)合位點(diǎn)充分活化，使得單位體積中結(jié)合更多蛋白A，最終純化效率較普通偶聯(lián)有30%的提高。蛋白A偶聯(lián)填料可直接......

詳細(xì)介紹

l 產(chǎn)品技術(shù)指標(biāo)

rec-Protein A/Sepharose 比值：2.8~3.5mg rec-Protein A/ml Sepharose

rec-Protein A分子量：34.85 KDa

每分子rec-Protein A可結(jié)合IgG位點(diǎn)數(shù)：4個(gè)

rec-Protein A可結(jié)合白蛋白位點(diǎn)數(shù)：無(wú)

線(xiàn)性流速：300-500 cm/h

耐壓指數(shù)：≤0.3 MPa（填料）

l 注意事項(xiàng)

請(qǐng)?jiān)趯?shí)驗(yàn)前仔細(xì)閱讀本rProtein A預(yù)裝柱使用說(shuō)明。同時(shí)，將所要的所有試劑、耗材拿出置于室溫，恢復(fù)至室溫使用。

l 產(chǎn)品保存

產(chǎn)品儲(chǔ)存于2-8℃，保質(zhì)期兩年。

l rec-Protein A預(yù)裝柱純化IgG抗體步驟

以下實(shí)驗(yàn)方法適用于從血清或腹水中純化IgG抗體，不同來(lái)源的IgG與rec-Protein A的結(jié)合能力不同，具體情況請(qǐng)參考表1。

1. 將血清或腹水樣品（推薦上樣量2 mL樣品/mL柱）裝入截留分子量3.5 KDa透析帶中，于4 ℃冰箱中對(duì)1× PBS（pH 7.4）透析過(guò)夜；

2. 將rec-Protein A-Sepharose裝柱固定好，用10倍柱體積1× PBS（pH 7.4）平衡層析柱，建議流速為1 mL/min；

3. 將透析好的樣品從層析柱上端加入，建議流速為1 mL/min，為了獲得更好的抗體結(jié)合效果可將流穿液再上樣，重復(fù)2遍（或?qū)悠?次性加入層析柱后置于搖床上，輕輕搖動(dòng)，結(jié)合30 min）；

4. 樣品結(jié)合后，用20倍柱體積1× PBS(pH 7.4)洗滌層析柱，建議流速為1 mL/min，勿讓層析柱滴干；

5. 洗脫IgG，向?qū)游鲋隙思尤胂疵撘海?00 mM，pH 2.7），用預(yù)先加有100 μL中和緩沖液（1M Tris，pH 9.0）的4 mL Ep管接收，2 mL /管，共收集10倍柱體積，進(jìn)行10 % SDS-PAGE電泳，確定IgG樣品所在管，回收樣品。

6. 用5倍柱體積再生緩沖液（100 mM，pH 2.0）進(jìn)行再生處理，再加入10倍柱體積ddH2O清洗層析柱。最后于層析柱中加入10倍柱體積, 20% Ethanol，4~8 ℃冰箱保存處理。

l 同類(lèi)產(chǎn)品純化效果比較

美國(guó)某品牌的rProtein A Sepharose 4FF 親和層析柱對(duì)人血清進(jìn)行純化，其對(duì)人IgG的結(jié)合量約為34 mg/mL Medium。

表1 rProtein A與不同來(lái)源Ig的反應(yīng)活性情況

IgG類(lèi)型	Protein A	IgG類(lèi)型	Protein A	IgG類(lèi)型	Protein A
人 IgG1	++++	小鼠 IgG2b	+++	倉(cāng)鼠 Ig	+
人 IgG2	++++	小鼠 IgG3	++	豚鼠 Ig	++++
人IgG3	-	小鼠 IgM	+/-	牛 Ig	++
人IgG4	++++	大鼠 IgG1	-	馬	++
人IgA	++	大鼠 IgG2a	-	奶牛	++
人n IgD	++	大鼠 IgG2b	-	豬	+++
人IgE	++	大鼠 IgG2c	+	綿羊	+/-
人 IgM	++	大鼠 IgM	+/-	山羊	-
小鼠 IgG1	+	兔 Ig	++++
小鼠 IgG2a	++++	雞 Ig	-

表2 rProtein A預(yù)裝柱系列產(chǎn)品參數(shù)

特性	rProtein A	特性	rProtein A
柱體積規(guī)格	1mL，5mL	填料穩(wěn)定性	＞20純化周期
基質(zhì)組成	4%高交聯(lián)度瓊脂糖	pH穩(wěn)定性	pH 2~11
基質(zhì)平均粒徑	90μm	推薦工作pH范圍	pH 3~10
功能基團(tuán)	rProtein A：34.85kDa； IgG結(jié)合位點(diǎn)：4	推薦在位清洗pH范圍	pH 2~11
配基密度	≈3mg rProtein A/mL 基質(zhì)	工作溫度	4~40℃
結(jié)合能力	30-55mg人IgG/mL填料	運(yùn)輸條件	20%乙醇浸泡，室溫運(yùn)輸
推薦流速	30~150cm/mL	貯藏條件	20%乙醇條件下， 4~8℃保存