掌上離心機(jī)的離心分離方法仍然具有分離范圍廣、容量大等優(yōu)點(diǎn);可研究天然生物大分子的水動(dòng)力特性;生物大分子的片段分離可在電離介質(zhì)中進(jìn)行;緩沖液限制很小(在電泳技術(shù)中,由于電流的熱效應(yīng),緩沖液的使用受到限制)。此外,離心仍然廣泛應(yīng)用于各種實(shí)驗(yàn)方法的預(yù)處理階段??紤]到各個(gè)研究部門的設(shè)備分布,在很多情況下離心的使用是相當(dāng)廣泛的。差速離心率區(qū)密度梯度離心和等密度離心作為一種有效的分離純化方法,在生物大分子的研究中也發(fā)揮著重要作用。下面就來(lái)說(shuō)說(shuō)它的分離要點(diǎn):
1、污染防治:
為避免生物大分子在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中部分損傷而引起的降解或變性,降解的原因有很多,如實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的外力;有些酶被污染等,但見(jiàn)的原因是酶的功能。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,由于樣品中混入了??一些脫氫酶,生物大分子發(fā)生了變性??。
2、避免變性
(1)掌上離心機(jī)離心前將旋轉(zhuǎn)頭預(yù)冷至接近離心溫度(在冰箱中放置過(guò)夜或在培養(yǎng)箱中保溫)。對(duì)于超速離心機(jī)來(lái)說(shuō),它的制冷系統(tǒng)主要是用來(lái)抵消旋轉(zhuǎn)頭在稀薄空氣中高速運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí),旋轉(zhuǎn)頭表面的線速度從次原因速度到超原因速度時(shí)空氣動(dòng)力摩擦產(chǎn)生的熱量。在真空中只有輻射傳熱的條件下,高速運(yùn)轉(zhuǎn)的旋轉(zhuǎn)頭的溫度從常溫(如夏季30~35℃)長(zhǎng)期下降至5℃(如1小時(shí)左右)。一般應(yīng)預(yù)冷至接近離心溫度(±2℃),以保證在離心初期(15分鐘內(nèi))旋轉(zhuǎn)頭溫度與樣品溫度一致。
(2)使用固定角度或近垂直管旋轉(zhuǎn)頭或垂直管旋轉(zhuǎn)頭進(jìn)行梯度離心時(shí),必須使用離心機(jī)的慢加速(0~500rpm)和慢減速(500rpm~0)功能,以保證平穩(wěn)梯度方向的轉(zhuǎn)換。
(3)掌上離心機(jī)在離心開(kāi)始和結(jié)束時(shí)小心拿取離心管,避免振動(dòng)過(guò)大。
(4)卸樣過(guò)程應(yīng)在無(wú)振動(dòng)試驗(yàn)臺(tái)上進(jìn)行,環(huán)境溫度與離心溫度相近。卸樣方法應(yīng)穩(wěn)定,外力小,盡量不要用泵輸送樣品。