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臨床基因擴(kuò)增(PCR/DNA)實(shí)驗(yàn)室介紹

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PCR實(shí)驗(yàn)室實(shí)物后照片 簡(jiǎn)介:Pcr實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室、DNA實(shí)驗(yàn)室,基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡(jiǎn)稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DN段,可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過(guò)DNA基因追蹤系統(tǒng),能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量,其精確度高達(dá)納米級(jí)別,精確檢測(cè)乙肝病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量、是否復(fù)制、是否傳染、傳......

詳細(xì)介紹

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PCR實(shí)驗(yàn)室實(shí)物后照片
 
簡(jiǎn)介:Pcr實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室、DNA實(shí)驗(yàn)室,基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡(jiǎn)稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DN段,可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過(guò)DNA基因追蹤系統(tǒng),能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量,其精確度高達(dá)納米級(jí)別,精確檢測(cè)乙肝病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量、是否復(fù)制、是否傳染、傳染性有多強(qiáng)、是否必要服藥、肝功能有否異常改變能及時(shí)判斷病人使用哪類抗病物、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗(yàn)依據(jù) 
功能:能夠?qū)颊卟∏檫M(jìn)行科學(xué)、準(zhǔn)確、實(shí)時(shí)的掌控,并結(jié)合抗HBV與T細(xì)胞免疫來(lái)打破免疫耐受,阻斷肝病病毒復(fù)制的療法、有效的分解肝炎病毒,解決了乙肝病毒易變異、耐藥,病毒復(fù)制模板難以治療,人體免疫耐受狀態(tài)不易打破等醫(yī)學(xué)難題,能迅速消除臨床癥狀,而且有效抑制乙肝病毒復(fù)制,明顯加快e抗原、抗體的血清轉(zhuǎn)換速度,殺滅血液及肝細(xì)胞內(nèi)的病毒,為防止再感染提供了長(zhǎng)期保護(hù),有效阻斷和逆轉(zhuǎn)肝纖維化、肝硬化進(jìn)程。 
基本建設(shè)方案 
1、建立樣品準(zhǔn)備區(qū) 
這個(gè)區(qū)域?qū)iT(mén)用作樣品的準(zhǔn)備,在制備和操作用于核酸提取的試劑時(shí)應(yīng)該采取預(yù)防措施:⑴PCR產(chǎn)物和帶有要擴(kuò)增序列的DNA克隆不能在這個(gè)房間操作。⑵組織培養(yǎng)物、組織標(biāo)本和血清樣品都帶進(jìn)樣品準(zhǔn)備間處理,以根據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或RNA。⑶用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。⑷DNA樣品應(yīng)該用有專門(mén)的防護(hù)或正壓活塞式移液管操作,以防止在吸取樣品時(shí)有氣溶膠遺留。⑸大體積樣品應(yīng)該用單獨(dú)包裝的無(wú)菌一次性移液管吸取。⑹管子打開(kāi)前都要簡(jiǎn)短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生,而且管子不能用力崩開(kāi),這樣會(huì)產(chǎn)生氣溶膠。⑺任何時(shí)候都應(yīng)該穿實(shí)驗(yàn)服和帶手套,手套要經(jīng)常更換,尤其在抽提過(guò)程中每一步之間都要更換。實(shí)驗(yàn)服要專門(mén)用于樣品準(zhǔn)備間,經(jīng)常清洗。 
2、樣品準(zhǔn)備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作,這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會(huì)。為了避免這一問(wèn)題,反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報(bào)道。 
3、建立前PCR區(qū)。 
該去專門(mén)用于準(zhǔn)備各種反應(yīng),這個(gè)區(qū)域必須保持干凈,而且沒(méi)有來(lái)自克隆和樣品準(zhǔn)備的污染。前PCR區(qū)必須要有試劑和準(zhǔn)備,特別是專門(mén)用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管。 
4、PCR實(shí)驗(yàn)室試劑的操作。 
⑴所用的所有溶液都應(yīng)該沒(méi)有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。⑵所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的-新鮮蒸餾的去離子水,用0.22μm過(guò)濾的,并且是高壓滅菌。⑶在20℃到25℃貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類的抗微生物劑,在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。⑷所用試劑都應(yīng)該以大體積配制,實(shí)驗(yàn)一下看試劑是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。⑸所有試劑和樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。⑹新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗(yàn)⑺樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時(shí)都應(yīng)該小心保存。 
5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物。 
⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃,在實(shí)驗(yàn)室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。⑵如果你的實(shí)驗(yàn)室使用多套引物,以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì),可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。⑶作為一個(gè)規(guī)則,應(yīng)該保存一套陰性、弱陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照樣品來(lái)分析樣品配制和PCR前過(guò)程的效率和潔凈程度。而且,你也希望通過(guò)使用一個(gè)已知的弱陽(yáng)性樣品來(lái)驗(yàn)證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。⑷陰性樣品要與每組樣品同時(shí)做,以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染,陰性對(duì)照應(yīng)該包括核酸以外的所有試劑。⑸當(dāng)做陽(yáng)性對(duì)照時(shí),有兩個(gè)理由決定了應(yīng)該使用最少數(shù)量的核酸。⑹由于必須有對(duì)照反應(yīng),對(duì)照模板的特點(diǎn)應(yīng)該予以考慮。 
6、控制污染的方法。 
已設(shè)計(jì)出很有力的酶學(xué)方法用來(lái)消除一種形式的污染—使用UNG,這一技術(shù)能有效地消除由PCR產(chǎn)物引起的污染。另一種控制污染的方法是使用紫外線,這種方法不能*消除污染問(wèn)題,但可以將污染降低幾個(gè)數(shù)量級(jí)。 
7、后PCR區(qū)PCR完成以后,需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù),應(yīng)該留出一個(gè)專門(mén)用于反應(yīng)后處理樣品的地方。后PCR活動(dòng)中使用的所用試劑、一次性耗材和儀器都必須是專門(mén)用于這一目的,決不能把實(shí)驗(yàn)室這一區(qū)域的試劑或儀器用于任何前PCR活動(dòng)
 
應(yīng)用場(chǎng)所:
 
第三方醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所,司法鑒定機(jī)構(gòu),臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu),刑偵技術(shù)鑒定機(jī)構(gòu),農(nóng)牧業(yè)基因檢測(cè),食品行業(yè)轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè),食品藥品監(jiān)督所,疾控中心等


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