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伊萊博生物科技（上海）有限公司
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更新時間：2025-06-26 15:47:18瀏覽次數(shù)：72
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1. cPM小鼠模型構(gòu)建策略選擇
A. 心臟特異性啟動子選擇
常用啟動子：
αMHC（Myh6）：成年心肌細胞特異性表達（胚胎期低表達）。
ct*T（Tnnt2）：胚胎期和成年期均高表達。
Nppa（ANF）：心力衰竭時激活，可用于病理模型。
B. 基因操作方式
過表達模型：將目標基因與心臟啟動子連接（如AAV9載體或轉(zhuǎn)基因小鼠）。
條件性敲除（cKO）：需結(jié)合Cre-loxP系統(tǒng)（如αMHC-Cre × floxed基因小鼠）。
條件性激活（如GOI）：利用Tet-on/off系統(tǒng)或Cre依賴的激活工具。
2.cPM小鼠模型構(gòu)建 技術(shù)流程
A. 載體構(gòu)建
克隆心臟啟動子（如αMHC 5.5 kb片段）。
插入目標基因（或sgRNA用于CRISPR編輯）。
添加報告基因（如GFP或LacZ）便于表型驗證。
B. 小鼠品系生成
轉(zhuǎn)基因小鼠：顯微注射載體至受精卵原核。
基因敲除/敲入：CRISPR-Cas9或ES細胞打靶。
條件性模型：需先獲得floxed小鼠（loxP位點 flanking 目標基因），再與心臟特異性Cre小鼠交配。
C. 品系驗證
基因型鑒定：PCR或測序確認目標基因整合。
表達驗證：qRT-PCR/Western blot檢測心臟特異性表達。
功能評估：超聲心動圖（Echo）、心電圖（ECG）、組織病理學（如Masson染色檢測纖維化）。
3. 常見問題與優(yōu)化
A. 非特異性表達
解決：驗證啟動子特異性（如分離肝、腦、骨骼肌組織排除泄漏表達）。
優(yōu)化：使用更嚴格的啟動子（如ct**比αMHC胚胎期表達更強）。
B. Cre毒性
αMHC-Cre：高表達可能導致心肌肥厚（需選擇低表達品系，如MerCreMer）。
誘導型Cre（如他莫xi芬誘導的Cre-ERT2）可避免發(fā)育期影響。
C. 表型異質(zhì)性
解決：維持遺傳背景一致（如回交至C57BL/6J 10代以上）。
4. 應(yīng)用示例
cPM過表達模型：
目標：研究心肌肥厚（如過表達calcineurin）。
方法：αMHC啟動子驅(qū)動calcineurin轉(zhuǎn)基因小鼠。
cPM敲除模型：
目標：研究心臟代謝（如PPARα敲除）。
方法：αMHC-Cre × PPARα-floxed小鼠。
5. 注意事項
倫理審批：確保實驗符合動物福利規(guī)范（如3R原則）。
對照設(shè)計：同窩野生型（WT）和雜合子（HET）對照。
表型分析時間點：根據(jù)目標疾病（如心力衰竭模型需長期隨訪）。
