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伊萊博生物科技（上海）有限公司
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一、肺纖維化背景簡介
肺纖維化（pulmonary fibrosis，PF)是肺組織異常修復(fù)造成不可逆損傷的一類疾病，以炎癥和細胞外基質(zhì)沉積為特征，呈進展性和致死性的彌漫性肺間質(zhì)疾病，其中，特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)發(fā)病率。
二、肺纖維化小鼠模型構(gòu)建簡介
構(gòu)建一個理想的肺纖維化模型，不僅有助于進一步篩選肺纖維化生物標志物，同時也為深入研究肺纖維化發(fā)病機制及動物臨床治療肺纖維化和研發(fā)新藥提供科學(xué)基礎(chǔ)。
三、肺纖維化小鼠模型構(gòu)建方法
1. 實驗動物
C57小鼠 6周齡
2. 實驗材料
blms，注射器
3. blms誘導(dǎo)模型制備流程
（1）小鼠按照麻醉劑劑量麻醉后固定，呈仰臥位姿勢，氣管居中，暴露頸部，剪毛備皮，無水乙醇消毒后沿頸部中線開口（開口大小：0.5-1cm左右）緩慢鈍性分離至氣管，此時需要輕柔操作，減少因手術(shù)操作造成的氣管損傷。
（2）使用注射器（1ml或者微量注射器，胰島素針不失為好的選擇），針頭幾乎平行于氣管平面，經(jīng)氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端插入氣管內(nèi)，回抽無阻力，則注入少量的blms溶液（不超過0.2 ml/只，肺內(nèi)大量積液會導(dǎo)致動物的死亡）。
（3）注射完畢后，縫合傷口，后將動物直立1-3 min，適度左右轉(zhuǎn)動，并輕輕按摩小鼠胸部，保證blms在肺內(nèi)均勻分布，動物清醒后常規(guī)飼養(yǎng)。（3天左右即可出現(xiàn)損傷，體重降低等癥狀）28d后收集樣本。
特發(fā)性：
1. 選用SD大鼠或C57小鼠，通過blms（5mg/kg）或者脂多糖（5mg/kg）氣管內(nèi)給藥，建立特發(fā)性肺纖維化模型。
2. 麻醉動物，仰臥固定于實驗臺上。
3. 頸部去毛后碘伏消毒，切開皮膚，逐層暴露氣管。
4. 將微量注射器經(jīng)兩氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端刺入氣管，回抽無阻力后，注入LPS溶液或者BLM溶液。
5. 手術(shù)完畢后迅速將動物直立、旋轉(zhuǎn)，使藥液在肺內(nèi)分布均勻。
6. 動物清醒后常規(guī)飼養(yǎng)，注意術(shù)后護理，成模周期一般在6個月左右
4.模型鑒定
4.1 HE染色觀察肺組織肺泡炎程度
肺組織肺泡炎評分：無肺泡炎計1 分，輕、中、重度肺泡炎分別計2、3、4 分。輕度肺泡炎主要表現(xiàn)為單核細胞浸潤，肺泡間隔增寬但結(jié)構(gòu)正常，浸潤局限于近胸膜部，受累面積小于全肺的20 %；中度肺泡炎受累面積占全肺20 % ~ 50 %；重度肺泡炎受累面積占全肺的50 % 以上，偶見肺泡腔內(nèi)有單核細胞及出血造成實變。
4.2 Masson染色觀察肺組織肺纖維化程度
肺纖維化程度評分：無纖維化計1 分，輕、中、重度肺纖維分別計2、3、4 分。輕度纖維化主要累及胸膜及胸膜下肺間質(zhì)，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，受累面積小于20 %；中度纖維化受累面積占全肺的20 %~50 %；重度纖維化受累面積占全肺的50 % 以上，肺實質(zhì)紊亂，并有融合，可見大小不等的囊氣腔。
四、小結(jié)
在PE動物模型中，BLM造模可行性好，研究性強，能夠重視一般PE，其用于IPE發(fā)病機制的研究和有效治療藥物的研發(fā)具有很大的實用價值。但是BPF動物模型與臨床IPE相比仍存有一定差異，在實驗研究應(yīng)用方面也有一定局限性，因此需加強對BLM作用機制及IPE的研究，進一步明確其相關(guān)性。
五、參考文獻
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[2]Villarreal AM，Yu H，Printz MP．Bradykinin—induced re— duction in collagen gene expression involve prostacyclin[J]． Hypertension，1998，32(1)：81—84．
[3]蔡后榮 ．2011年特發(fā)性肺纖維化診斷和治療循證新指 南解讀 ．中國呼吸與危重監(jiān)護雜志，2011，10(4)：
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