光老化動(dòng)物模型構(gòu)建服務(wù)

一、光老化背景簡(jiǎn)介

皮膚衰老是一個(gè)由基因和外界環(huán)境因素等共同作用下的結(jié)果。皮膚老化根據(jù)影響因素的不同分為內(nèi)源性老化和外源性老化。內(nèi)源性老化是指基因?qū)用娴碾S著時(shí)間推移產(chǎn)生的自然老化。外源性老化是指環(huán)境因素如紫外線(xiàn)輻射、吸煙、毒害化學(xué)品等影響下產(chǎn)生的皮膚損害積累，其中紫外線(xiàn)輻射是導(dǎo)致外源性老化最主要的因素。因此，外源性老化又稱(chēng)為皮膚光老化。建立有效的皮膚光老化動(dòng)物模型，是研究及防治人體皮膚光老化的基礎(chǔ)。

二、光老化模型簡(jiǎn)介

皮膚光老化動(dòng)物模型的設(shè)計(jì)思路主要是模擬真實(shí)的紫外照射情況。日光中的紫外線(xiàn)（ultraviolet，UV）分為3個(gè)波段：短波紫外線(xiàn)（UVC，190～290 nm）、中波紫外線(xiàn)（UVB，290～320 nm）和長(zhǎng)波紫外線(xiàn)（UVA，320～400 nm）。其中UVC幾乎全被臭氧層吸收，到達(dá)地面的主要為 UVA 和 UVB；UVA 的活性很低，而UVB活性是UVA活性的1000倍。UVB 主要導(dǎo)致皮膚表皮層和真皮淺層的損傷，可引起皮膚松弛、干燥、粗糙、皺紋加深、色素沉著等，甚至可以導(dǎo)致皮膚癌。因此皮膚光老化模型一般使用采用窄譜UVB（311～312 nm）作為紫外照射光源。

三、光老化動(dòng)物模型構(gòu)建服務(wù)的方法

1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

10-12周雌性裸鼠

2. 實(shí)驗(yàn)設(shè)備

311nm的UVB紫外燈管（安裝在自制紫外照射箱中，紫外燈距離小鼠背部約30cm）。紫外照度計(jì)用于監(jiān)測(cè) 輻照度。

3.實(shí)驗(yàn)流程

造模時(shí)間共計(jì)八周，間隔一天進(jìn)行紫外照射，流程如下表：

4.光老化模型鑒定

4.1 一般狀態(tài)及皮膚宏觀(guān)評(píng)價(jià)

隔日觀(guān)察裸鼠的一般狀態(tài)，如食量、精神狀態(tài)等。同時(shí)，對(duì)裸鼠背部皮膚與光老化相關(guān)的宏觀(guān)特征（如皺紋、增厚、粗糙、彈性、紅斑等）進(jìn)行觀(guān)察評(píng)價(jià)，并對(duì)其背部皮膚進(jìn)行拍照記錄。根據(jù)下表所示皮膚光老化評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其背部皮膚進(jìn)行宏觀(guān)評(píng)分。

4.2 皮膚彈性測(cè)試

根據(jù) Tsukahara 等人建立的提皮測(cè)試方法對(duì)裸鼠皮膚彈性進(jìn)行評(píng)價(jià)，每四周一次，共檢查兩次。用拇指和食指將裸鼠背部皮膚沿正中線(xiàn)靠后的位置輕輕提起（以裸鼠四肢不懸空為度）后立即放開(kāi)，并記錄皮膚恢復(fù)至初始狀態(tài)的時(shí)間[8]。

4.3 皮膚組織學(xué)檢測(cè)

4.3.1 HE 檢測(cè)：表皮組織結(jié)構(gòu)觀(guān)察及厚度測(cè)量

皮膚組織經(jīng) HE 染色后，光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察皮膚組織角質(zhì)層、表皮層和真皮層結(jié)構(gòu)及細(xì)胞層數(shù)；觀(guān)察毛囊、汗腺、皮脂腺等附屬器官的形態(tài)；以及觀(guān)察是否有出血現(xiàn)象及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等。

4.3.2 Masson 檢測(cè)：膠原纖維的分布及形態(tài)觀(guān)察

皮膚組織經(jīng) Masson 染色后，光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察顯示膠原纖維呈藍(lán)色，胞質(zhì)、肌纖維和紅細(xì)胞紅色，胞核藍(lán)褐色。觀(guān)察膠原纖維的含量、形態(tài)及分布的變化情況。

四、小結(jié)：

選用311nm的UVB紫外線(xiàn)燈照射8周可以成功建立小鼠皮膚光老化模型。模型組小鼠的皮膚肉眼可見(jiàn)變紅、松弛、粗糙、色素沉著、皺紋增加等； 病理觀(guān)察可發(fā)現(xiàn)表皮增厚，膠原纖維含量減少， 排列紊亂等現(xiàn)象。

五、參考文獻(xiàn)

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