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伊萊博生物科技(上海)有限公司
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參考價 | ¥ 300 |
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更新時間:2024-07-25 14:56:32瀏覽次數:914
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將質粒 DNA 導入細菌的過程稱為轉化( Transformation )。此感受態(tài)細菌細胞在 CaCl 2 低滲溶液中膨脹為球狀(感受態(tài)細菌的制備,見前)。質粒 DNA 與 CaCl 2 形成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復合物黏附于細菌表面,經 42℃ 短時間熱沖擊處理,促進細胞吸收 DNA 復合物。在豐富培養(yǎng)基上生長數小時后,球狀細胞復原并分lie增殖。被轉化的細菌中,外源基因得到表達。在選擇性培養(yǎng)平板上,可選出所需的轉化子(即含有質粒 DNA 的細菌)。鈣處理的感受態(tài)細胞,一般每微克 DNA 能獲得 10 5 ~ 10 6 個轉化子。除化學方法轉化細菌外,還有電穿孔法( Electroporation ),其轉化率可高達 10 9 ~ 10 10 個轉化子 /μg 質粒 DNA 。
二、實驗器材
1.培養(yǎng)皿
2.恒溫培養(yǎng)箱
三、試劑
1.LB 培養(yǎng)基
2.選擇性 LB 瓊脂培養(yǎng)平板(含氨芐qms,終濃度為 50μg/ml )
3.氨芐qms 100 mg/ml
4.宿主細菌:經 100 mmol/L CaCl 2 處理的感受態(tài)細菌 DH5α
四、操作步驟
1、取50μL大腸桿菌感受態(tài)細胞,加入適量質粒(體積不得超過4μL)冰浴30min后42℃熱激90s ,馬上放回冰上,冰浴2min ;
2、加400μLLB培養(yǎng)基,于37℃搖床慢搖振蕩培養(yǎng)45-60min;
3、取50-100μL涂在含有氨芐qms(100μg/mL)的LB固體培養(yǎng)基上,37℃倒置培養(yǎng)過夜。