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片免疫熒光單標檢測實驗
免疫熒光單標檢測實驗
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更新時間:2024-07-26 13:26:13瀏覽次數(shù):2187

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【簡單介紹】
免疫熒光單標檢測實驗是一種將熒光素與抗體連接成熒光抗體,再與待檢標本中的抗原反應,并在熒光顯微鏡下觀察抗原抗體復合物散發(fā)的熒光,以此對標本中的抗原進行鑒定和定位的技術(shù)。

免疫熒光單標檢測實驗


免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence technique)又稱熒光抗體技術(shù),是標記免疫技術(shù)中發(fā)展早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術(shù)的基礎上建立起來的一項技術(shù)。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。它是根據(jù)抗原抗體反應的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光基團,再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應抗原(或抗體)。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質(zhì)和定位。


免疫熒光單標檢測實驗

是根據(jù)抗原抗體反應的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光素,制成熒光抗體,再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢測組織或細胞內(nèi)的相應抗原(或抗體)。在組織或細胞內(nèi)形成的抗原抗體復合物上含有標記的熒光素,利用熒光顯微鏡觀察標本,熒光素受外來激發(fā)光的照射而發(fā)生明亮的熒光(黃綠色或橘紅色),可以看見熒光所在的組織細胞,從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位,以及利用定量技術(shù)測定含量。

免疫熒光有直接法和間接法兩種:

(1)直接法:將標記的特異性熒光抗體,直接加在抗原標本上,經(jīng)一定的溫度和時間的染色,用水洗去未參加反應的多余熒光抗體,室溫下干燥后封片、鏡檢。

(2)間接法:如檢查未知抗原,先用已知未標記的特異抗體與抗原標本進行反應,用水洗去未反應的抗體,再用標記的抗抗體(第二抗體)與抗原標本反應,使之形成抗原—抗體—抗體復合物,再用水洗去未反應的標記抗體,干燥、封片后鏡檢。如果檢查未知抗體,則表明抗原標本是已知的,待檢血清為抗體,其它步驟的抗原檢查相同。標記的抗抗體是抗球蛋白抗體,同于血清球蛋白有種的特異性。




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