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LPS誘導SD大鼠膝關節(jié)成纖維樣滑膜細胞炎癥模型建立
2020-12-3 閱讀(3419)
目的 建立Sprague Dawley(SD)大鼠的正常膝關節(jié)滑膜細胞原代培養(yǎng)方法及脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)誘導成纖維樣滑膜細胞( fibroblast-like synoviocytes,FLS) 炎癥模型。
方法 選取80~120g SPF級幼年SD大鼠, 分離其滑膜組織,原代培養(yǎng)至第3代,用組織化學染色法和EdU法檢測FLS蛋白標志物vimentin和增殖功能。 同時,用滑膜組織作對照,檢測第3代至第8代原代培養(yǎng)FLS的特征蛋白表達,篩選具有生理功能的高純度且可用于后續(xù)實驗的FLS細胞。 LPS誘導FLS炎癥后,檢測LPS制激FLS不同時間點的 IL-1β和TNF-α的mRNA和蛋白表達,根據(jù)實驗結果確定LPS成功誘導FLS炎癥模型的時間點。檢測FLS被LPS誘導前后的細胞因子、增殖功能和特征蛋白的表達,為分析FLS炎癥模型提供實驗數(shù)據(jù)。
結果 采用0.2% I型膠原酶消化法,成功培養(yǎng)了FLS原代細胞。 經(jīng)檢測蛋白標志物vimentin, 第3代FLS純度達98%以上。 通過FLS特征蛋白檢測,篩選出具有生理功能且可用作后續(xù)實驗的FLS為第3代至第7代原代細胞。 通過對LPS誘導后的FLS的細胞因子和特征蛋白分析,確定1μg/mL LPS誘導FLS細胞3h,能復制出FLS炎癥模型。
