EPI300電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞是采用特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于DNA的電轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率10"cfu/μg DNA 以上。

基因型為:FmcrAΔ (mrr-hsdRMS-mcrBC) ф80dlacZ ΔM15Δ lacX74 recAl endA1araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galKλ-rpsL nupG trfA dhfr.

產(chǎn)品特點:EPI300細胞含有一個突變的trfA基因，該基因表達出的蛋白產(chǎn)物可以促進含有oriV復(fù)制子的質(zhì)粒的高拷貝擴繁，誘導(dǎo)劑I可以誘導(dǎo)trfA基因的表達。當(dāng)含有oriV復(fù)制子質(zhì)粒的EPI300 細胞在LB/2YT 或SOB培養(yǎng)基中生長時，trfA基因的表達被抑制，oriV復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)維持在很低的水平;當(dāng)在培養(yǎng)基中加入誘導(dǎo)劑I，oriV復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)可維持在很高的水平，提高了質(zhì)粒產(chǎn)量。因此EPI300菌株可以降低 oriV復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)，特別適合于各種不穩(wěn)定DNA 或毒性基因的克隆。[mrr-hsdRMS-mcrBC]基因型使EPI300菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA (例如:哺乳動物基因組DNA)。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)

粒 DNA 的提取。lacZAM15標(biāo)記的存在使EPI300可用于藍白斑篩選，rpsL賦予其lianmeisu抗性。操作方法:1.0.lcm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5min,待其瀝千水分,正置5min,使乙醇充分揮發(fā),待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5min充分降溫。2.取-70℃保存的電擊感受態(tài)細胞插入冰中5min,待其融化,加入目的DNA(質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手boda離心管底輕輕混勻,避免產(chǎn)生氣泡,立即插入冰中。A.測定轉(zhuǎn)化效率使用1μl 0.1ng/μl 的對照質(zhì)粒pUC19;B.對于連接產(chǎn)物,請用乙醇沉淀DNA后加入適量TE緩沖液(10mM Tris-HCl,pH7.5;1mMEDTA) 重懸,DNA濃度不超過100ng/μ,體積不超過5μl/50μl感受態(tài)。

3.用 200μl 槍頭將感受態(tài)-DNA混合物快速移到電擊杯中,避免產(chǎn)生氣泡,蓋上杯蓋。4.啟動電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置參數(shù):C=25μF,PC=200Ω,V=1.8kV(BioRad電轉(zhuǎn)儀推薦參數(shù));或C=25μF,

PC=200Ω,V=2.4kV(BTX ECM630或Bio-Rad GenePulser電轉(zhuǎn)儀推薦參數(shù));也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的參數(shù)操作。將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中,電擊完成快速插入冰中。