ZC104D菌株是實(shí)驗(yàn)室zuichangyong的感受態(tài)細(xì)胞。ZC104D電擊感受態(tài)細(xì)胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。缺失核酸內(nèi)切酶(endA1)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量;重組酶缺陷型(recA1)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性。lacZAM15的存在可進(jìn)行基于a互補(bǔ)原理上的藍(lán)白斑篩選實(shí)驗(yàn)。ZC104D電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1x10cfu/μg DNA?；蛐蜑?FmcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)ф80 lacZAM15 AlacX74 recAl araΔ139A(ara-

leu)7697 galU galKrps L(str)endA1 nupG操作方法:1.電極間距為 0.1cm 的電轉(zhuǎn)杯(Gene Pulser®/MicroPulserT™electroporation cuvettes)插入碎冰中，壓實(shí)冰面,冰中靜置5分鐘,使電轉(zhuǎn)杯充分降溫。(電轉(zhuǎn)杯重復(fù)使用方法:每次用完后,用大量的自來水沖洗干凈去掉菌液和DNA,用蒸餾水洗3遍,將其泡在75%乙醇中30分鐘,取出杯子,瀝

干液體,放在超凈臺(tái)中,使乙醇充分揮發(fā),蓋上蓋子放干燥地方備用)。2.取-70℃保存的感受態(tài)細(xì)胞插入冰中,待細(xì)胞剛化凍后,加入質(zhì)粒DNA或連接產(chǎn)物(洗脫或溶解質(zhì)粒

的溶液中離子不能太高,或用雙蒸水稀釋,對(duì)照pUC19可以用無菌水稀釋到10pg/μl,用手指boda管底輕輕混勻,立即插入冰中,在超凈臺(tái)中用無菌吸頭將細(xì)胞/DNA混合物快速轉(zhuǎn)移到電擊杯中,避免產(chǎn)生氣泡,確保細(xì)胞沉到杯底,蓋上杯蓋,空管保留待用。3.啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置電擊參數(shù):2.4kV,200Ω,25μF(BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser)。用紙巾

擦掉電轉(zhuǎn)杯外部的水分,將電轉(zhuǎn)杯放入電轉(zhuǎn)槽中進(jìn)行電擊。完成后,將電轉(zhuǎn)杯插入冰中,加入950μl 無抗生素的 SOC 或 LB培養(yǎng)基,并將液體轉(zhuǎn)移到原來保留的感受態(tài)空管中,37℃,150-250rpm 振蕩培養(yǎng)1小時(shí)。

4.取 100-200μl左右的菌液或稀釋后的菌液,涂布于含相應(yīng)抗生素的LB平板上,倒置放于37℃培養(yǎng)箱

培養(yǎng) 12-18小時(shí)。