ZC104D菌株是實驗室zuichangyong的感受態(tài)細胞。ZC104D電擊感受態(tài)細胞只能用于電擊轉化，不能用于熱激轉化。缺失核酸內切酶(endA1)，提高了質粒DNA的產(chǎn)量和質量;重組酶缺陷型(recA1)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性。lacZAM15的存在可進行基于a互補原理上的藍白斑篩選實驗。ZC104D電轉感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率可達1x10cfu/μg DNA。基因型為:FmcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)ф80 lacZAM15 AlacX74 recAl araΔ139A(ara-

leu)7697 galU galKrps L(str)endA1 nupG操作方法:1.電極間距為 0.1cm 的電轉杯(Gene Pulser®/MicroPulserT™electroporation cuvettes)插入碎冰中，壓實冰面,冰中靜置5分鐘,使電轉杯充分降溫。(電轉杯重復使用方法:每次用完后,用大量的自來水沖洗干凈去掉菌液和DNA,用蒸餾水洗3遍,將其泡在75%乙醇中30分鐘,取出杯子,瀝

干液體,放在超凈臺中,使乙醇充分揮發(fā),蓋上蓋子放干燥地方備用)。2.取-70℃保存的感受態(tài)細胞插入冰中,待細胞剛化凍后,加入質粒DNA或連接產(chǎn)物(洗脫或溶解質粒

的溶液中離子不能太高,或用雙蒸水稀釋,對照pUC19可以用無菌水稀釋到10pg/μl,用手指boda管底輕輕混勻,立即插入冰中,在超凈臺中用無菌吸頭將細胞/DNA混合物快速轉移到電擊杯中,避免產(chǎn)生氣泡,確保細胞沉到杯底,蓋上杯蓋,空管保留待用。3.啟動電轉儀,設置電擊參數(shù):2.4kV,200Ω,25μF(BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser)。用紙巾

擦掉電轉杯外部的水分,將電轉杯放入電轉槽中進行電擊。完成后,將電轉杯插入冰中,加入950μl 無抗生素的 SOC 或 LB培養(yǎng)基,并將液體轉移到原來保留的感受態(tài)空管中,37℃,150-250rpm 振蕩培養(yǎng)1小時。

4.取 100-200μl左右的菌液或稀釋后的菌液,涂布于含相應抗生素的LB平板上,倒置放于37℃培養(yǎng)箱

培養(yǎng) 12-18小時。