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貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
SH0061 | 超氧陰離子清除能力檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/48S) | 50管/48樣 |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系，清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。
測(cè)定原理：
AP-TEMED系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子，與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2－，NO2－與對(duì)氨基苯磺酸和α－萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，樣品對(duì)超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負(fù)相關(guān)。
組成：
產(chǎn)品名稱 | SH0061-50T/48S | Storage |
提取液：液體 | 50ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 3ml | 4℃避光 |
試劑二：粉劑 | 一瓶 | 4℃避光 |
試劑三：液體 | 15ml | 4℃ |
試劑四：液體 | 15ml | 4℃避光 |
試劑五：液體 | 15ml | 4℃避光 |
說明書 | 一份 | |
自備儀器和用品：
天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 ml玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
樣品處理：
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1ml提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測(cè)。
4. 粉劑藥物可配制成相同濃度，比如1mg/ml。
測(cè)定操作表：
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
試劑一（μl） | 40 | 40 |
試劑二（μl） | 160 | 160 |
H2O（μl） | 100 | |
充分混勻，25℃反應(yīng)1min | ||
樣品（μl） | 100 | |
試劑三（μl） | 200 | 200 |
充分混勻，37℃反應(yīng)30min | ||
試劑四（μl） | 200 | 200 |
試劑五（μl） | 200 | 200 |
充分混勻，37℃顯色20min，于1ml玻璃比色皿，在530nm處測(cè)定對(duì)照管和測(cè)定管的吸光值，分別記為A對(duì)照管和A測(cè)定管。 | ||
注意：對(duì)照管只需測(cè)定一次。
計(jì)算公式：
超氧陰離子清除率 I%=
注意事項(xiàng)：
1. 試劑一4℃可保存2個(gè)月，配制好的試劑二4℃可保存一周，建議實(shí)驗(yàn)前配制，并盡快使用。
樣品處理完后立即進(jìn)行測(cè)定，或者低溫保存不超過24小時(shí)。
