快捷型畢赤酵母高效感受態(tài)制備試劑盒 Pichia pastoris positive clone assay kit

Cat.NO.ZC136版本號(hào):2022-03-25

試劑盒組成、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性:

試劑盒組成20T100T

溶液A(制備液)105mL250mLx2

溶液B(轉(zhuǎn)化液)28mL150mL

溶液C(懸浮液)20mL100mL

Carrier DNA200 uL1mLx2

說(shuō)明書1份1份

儲(chǔ)存:-20℃保存，未開(kāi)封有效期24個(gè)月。

適用范圍:

適用于畢赤酵母。

產(chǎn)品說(shuō)明:

(一)酵母感受態(tài)細(xì)胞的制備:

1.活化菌種。-80℃保存的菌種在固體YPD 培養(yǎng)基平板上劃線30℃培養(yǎng)2-4天。

2.選取酵母菌落接種到 10mL 液體 YPD 培養(yǎng)基中30℃搖床過(guò)夜培養(yǎng)后將培養(yǎng)物按1%的接種量接種

到100mL液體YPD培養(yǎng)基中三角瓶中培養(yǎng)至OD值為0.6-10

注:每10mL菌液可用于一次轉(zhuǎn)化。以下操作步驟適于用于10mL菌液。

3.3,000rpm 離心 3min 收集菌體沉淀。

4.加入5mL 溶液A重懸菌體3.000rpm離心3min收集菌體沉淀

5.再加入200uL溶液A重懸菌體，轉(zhuǎn)移到無(wú)菌1.5mL離心管，即為制備好的感受態(tài)細(xì)胞，可直接用于轉(zhuǎn)化或凍存?zhèn)溆谩?/span>

6.制備好的感受態(tài)細(xì)胞需緩心冷凍后,再置千-80℃冰箱長(zhǎng)期保存。將感受態(tài)細(xì)胞放入程序降溫盒,或用

多層紙包裹放入泡沫盒中，先置于-80℃冰箱過(guò)夜后，再取出感受態(tài)置于-80℃冰箱，可保存半年。使用前冰上解凍或直接用于轉(zhuǎn)化。

注:緩慢冷凍會(huì)保證良好的轉(zhuǎn)化效率。擴(kuò)大酵母菌培養(yǎng)體積，相應(yīng)增加凍存液的使用量，可以一次性制

備多支酵母感受態(tài)細(xì)胞。