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Co-IP試劑盒 生化試劑

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具體成交價以合同協(xié)議為準

產(chǎn)品型號:YW023

品       牌:其他品牌

廠商性質:生產(chǎn)商

所  在  地:南京市

更新時間:2023-02-28 14:07:06瀏覽次數(shù):241

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CAS YW023 級別 超純、高純
免疫共沉淀Co-IP(Co-Immunoprecipitation)是基于抗體和抗原之間結合的專一性用于研究蛋白質相互作用的經(jīng)典方法。其原理是細胞在非變性條件下被裂解時,細胞內(nèi)存在的蛋白質與蛋白質相互作用體被保留下來,然后利用目標蛋白質特異性抗體進行免疫沉淀。沉淀得到的蛋白質復合體能夠通過變性凝膠電泳分離開來,以此定性或定量分析幾種蛋白質間相互作用

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

YW023

Co-IP試劑盒


 

1.產(chǎn)品概述

免疫共沉淀Co-IP(Co-Immunoprecipitation)是基于抗體和抗原之間結合的專一性用于研究蛋白質相互作用的經(jīng)典方法。其原理是細胞在非變性條件下被裂解時,細胞內(nèi)存在的蛋白質與蛋白質相互作用體被保留下來,然后利用目標蛋白質特異性抗體進行免疫沉淀。沉淀得到的蛋白質復合體能夠通過變性凝膠電泳分離開來,以此定性或定量分析幾種蛋白質間相互作用。

2.試劑

Reagents

Volume

 Storage

Cell lysis buffer

35 mL

4℃

Protein A/G-Beads

800 μL

4℃

Wash buffer I

15 mL

4℃

Wash buffer II

15 mL

4℃

Elution buffer

mL

4℃

Neutralization buffer

800 μL

4℃

Protease inhibitor

200 μL

-20℃


3.材料

 Poly Mac Tips  35個

4.實驗步驟

1. 蛋白提取

 

1) 細胞樣本

1 洗滌:預冷的 1 ml  1×PBS 洗滌樣品(約 1×107個細胞)2 次,最后一次吸干 1×PBS;

2 裂解:根據(jù)細胞量加入 1 ml Cell lysis buffer、10 ul Protease inhibitors,冰上充分裂解 20~30 min,期間顛倒混勻 3 次,再超聲3次,每次5 sec。

3 離心:4℃,13000 g,15 min,收集上清;

4 測BCA,將收集的上清用Cell lysis buffer稀釋到1ug/ul。

2) 組織樣本

1 研磨:取新鮮組織或深低溫組織(不少于 0.3g),置于研缽中,用液氮進行研磨,轉移組織粉末至新的 EP 管中;

2 裂解:加入 1 ml Cell lysis buffer、10 ul Protease inhibitors,冰上充分裂解 20~30min,期間顛倒混勻 3 次;

3 離心:4℃,13000 g,15 min,收集上清。

4 測BCA,將收集的上清用Cell lysis buffer稀釋到1ug/ul。

2.蛋白與抗體孵育

1 將步驟 1 得到的樣品,取 100 μL 作為 Input 組,取 900 μL 作為 IP 組,Input 組-80℃保存待用,IP 組管加入 2~5 μg 目的抗體;

2 4℃,垂直混勻器搖動孵育過夜。

(一般每個IP樣本需200-500μl細胞裂解物,濃度在1μg/μL左右,以下步驟以200μl細胞裂解物進行IP為例)

3. Protein-A/G 磁珠懸液準備

1 取 20 ul Protein A/G-Beads,4℃,瞬離棄上清;

2 加入 500 ul 預冷的Cell lysis buffer,混勻,瞬離棄上清,再重復洗滌 1 次;

3 用 100 ul 預冷的Cell lysis buffer 將 Protein A/G-Beads 配成懸液。

4. Protein-A/G 磁珠與抗體結合

1 取步驟 3 得到的 100 μL Protein A/G-Beads 懸浮液加入到 IP 組 EP 管中,4℃,垂直混勻器搖動 2~3 h;

5.洗滌、洗脫

1 將步驟 4 的 IP 組樣品,轉入 Poly Mac Tips中,500rpm,60 ses;

2 加入200ul Wash buffer I 轉IP樣品于 Poly Mac Tips中(盡量多的將IP樣品殘留轉移至 Poly Mac Tips中),500 rpm,1 min,再重復洗滌1次。

3 用 200ul Wash buffer II 轉IP樣品于 Poly Mac Tips中(盡量多的將IP樣品殘留轉移至 Poly Mac Tips中),500 rpm,1 min,再重復洗滌1次;

4 棄過濾液,標記新的EP管待用,加入100 ul Elution buffer,500 rpm,40 sec。

5 在收集的樣品中加入10 ul Neutralization buffer。

6 重復4、5步驟,收集220ul樣品,殘余用注射器吹入EP管,渦勻離心,-80℃保存待用。

5. 質譜檢測(選擇一)

6. western blot(選擇二)

8.注意事項

本產(chǎn)品Protease inhibitor 對人體有毒,操作時要特別小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi);

本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究使用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。


相關產(chǎn)品:

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

YW002

外泌體純化試劑盒(SEC)

2ml

YW005

外泌體提取試劑盒(EVtrap)

1ml

YW006

蛋白組學前處理試劑盒

48T

YW007

重組yidanbaimei(質譜級)

100 ug×1

YW009

重組賴氨酰內(nèi)切酶(質譜級)

20ug×5

YW011

多肽脫鹽小柱

96T

YW012

磷酸肽蛋白(肽段)提取試劑盒

5ml

YW013

色譜分析柱(含填料)

75um*20cm

YW015

支原體檢測試劑盒(PCR法)

10T

YW017

支原體清除劑

200ul

YW019

支原體預防劑

500ul

YW021

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500ul

YW023

Co-IP試劑盒

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