產(chǎn)品信息

本產(chǎn)品采用層析式雙抗體夾心法檢測(cè)Cas12和Cas13酶切割產(chǎn)物。當(dāng)靶基因經(jīng)過LAMP，RAA/RPA，PCR擴(kuò)增后，使用Cas12和Cas13酶同時(shí)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行切割，Cas12酶對(duì)應(yīng)的DNA信號(hào)探針A（Cas12切割），與Cas13酶對(duì)應(yīng)的RNA信號(hào)探針B（Cas13切割）進(jìn)行如下修飾，即可使用本產(chǎn)品進(jìn)行切割產(chǎn)物的檢測(cè)：

1）  探針A一端修飾有（Biotin），另一端修飾有異硫氰酸熒光素（FITC）或6-羧基熒光素（6-FAM），探針B一端修飾有（Biotin），另一端修飾有（Dig）；

2）  或，探針A一端修飾有（Biotin），另一端修飾有（Dig），探針B一端修飾有（Biotin），另一端修飾有異硫氰酸熒光素（FITC）或6-羧基熒光素（6-FAM）。

預(yù)期用途:

Cas12和Cas13雙酶切后的產(chǎn)物檢測(cè)。

包裝規(guī)格/貨號(hào):

包裝規(guī)格：50條/桶，鋁箔袋防潮包裝。

圖1. 結(jié)構(gòu)示意圖

儲(chǔ)存條件及有效期:

儲(chǔ)存條件：存放于避光干燥處，儲(chǔ)存溫度4~30℃。

有效期：12個(gè)月。

操作步驟:

1. 根據(jù)檢測(cè)樣品數(shù)量取出相應(yīng)數(shù)量的試紙條，并在吸收墊（圖1）上做好標(biāo)記。每根試紙條只能用于單次，DNA探針和RNA探針同時(shí)切割的產(chǎn)物檢測(cè)。酶切產(chǎn)物體積為50~100µL時(shí)，可直接在200µL PCR反應(yīng)管中檢測(cè)核酸產(chǎn)物，產(chǎn)物體積不足50µL時(shí)，需在PCR管內(nèi)加超純水補(bǔ)足體積至50µL，吸打混勻后，才能進(jìn)行檢測(cè)。

2. LAMP，RAA/RPA，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物加入CRISPR體系酶切反應(yīng)結(jié)束后，打開PCR反應(yīng)管，將試紙條結(jié)合墊端（箭頭端）插入PCR反應(yīng)管（圖1），液面不得超過結(jié)合墊最上端，待判讀區(qū)全部浸潤(rùn)（約需1～2min，外界環(huán)境溫度較低時(shí)，如冬季，會(huì)降低吸水速度，判讀區(qū)浸潤(rùn)時(shí)間將會(huì)延長(zhǎng)），待檢測(cè)線（T線）顯色后，可以將試紙條拿出。根據(jù)試紙條顯色情況直接讀取檢測(cè)結(jié)果。

3.  質(zhì)控線（C線）顯色后10min內(nèi)觀察結(jié)果，10min后判讀無效。

4.    記錄檢測(cè)結(jié)果，將試紙條密封丟棄在安全處。

結(jié)果判讀:

圖2. CRISPR雙酶切結(jié)果判讀示意

顏色說明：本產(chǎn)品為變色雙矯正顯色試紙條，其中C線為紫色，T1為紅色，T2為藍(lán)色。在探針A和探針B等摩爾濃度混合，且終濃度≤500nM時(shí)，帶有FAM標(biāo)記的探針酶切后，T1顯色為紅色，C線逐漸變?yōu)樗{(lán)色；帶有Dig標(biāo)記的探針酶切后，T2顯色為藍(lán)色，C線逐漸變?yōu)榧t色，從而達(dá)到互相矯正的目的。

1.   陽性（+）：

試紙條質(zhì)控線（C線）和2條檢測(cè)線（T線）均出現(xiàn)條帶，其中T1為紅色，T2為藍(lán)色，C線為紫色；試紙條質(zhì)控線（C線）不顯色，T1為紅色，T2為藍(lán)色時(shí)，說明Cas12和Cas13可進(jìn)行有效酶切，并激活報(bào)告基團(tuán)顯色，相應(yīng)的靶基因均可判定為陽性。

試紙條質(zhì)控線（C線）和其中1條檢測(cè)線（T線）出現(xiàn)條帶，其中：T1為紅色，C線為藍(lán)色時(shí)，說明FAM標(biāo)記信號(hào)分子的相應(yīng)靶基因可判定為陽性；T2為藍(lán)色，C線為紅色時(shí)，說明Dig標(biāo)記分子的相應(yīng)的靶基因可判定為陽性。

2.  陰性（-）：

試紙條質(zhì)控線（C線）為紫色色條帶，檢測(cè)線（T線）不顯色，判定為陰性結(jié)果。該結(jié)果表明Cas12或Cas13均不能切割報(bào)告分子，未能激活報(bào)告基團(tuán)顯色。

3.  無效：

試紙條質(zhì)控線（C線）和2條檢測(cè)線（T線）均未出現(xiàn)條帶，提示所用的試紙條或擴(kuò)增試劑可能已經(jīng)損壞、失效或操作有誤。此時(shí)，應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，重新擴(kuò)增和檢測(cè)。如果問題仍然存在，應(yīng)立即停止使用同一批號(hào)的產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。

注意事項(xiàng)及安全提示:

1. 本產(chǎn)品應(yīng)結(jié)合探針使用，如探針合成純度不足，探針含游離的Biotin或者游離的FITC時(shí)，會(huì)導(dǎo)致以超純水為陰性對(duì)照的切割產(chǎn)物T線呈現(xiàn)紅色，即陰性對(duì)照呈現(xiàn)假陽性結(jié)果。

2. 本產(chǎn)品可用于探針合成質(zhì)量的檢測(cè)。調(diào)整空白陰性對(duì)照中探針的使用濃度至400 nM，并進(jìn)行切割反應(yīng)。當(dāng)試紙條結(jié)合墊端浸入Cas12/Cas13切割產(chǎn)物后的5~7 min內(nèi)，試紙條T線顯紅色，即說明探針純度難以滿足實(shí)驗(yàn)要求，會(huì)因探針純度不足導(dǎo)致假陽性結(jié)果。建議更換探針合成供應(yīng)商，并重新合成探針。

3. 本產(chǎn)品僅供科研使用。使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書，嚴(yán)格按照說明書操作。違反或者未按說明書進(jìn)行操作可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。

4. 產(chǎn)品應(yīng)依照說明書要求，儲(chǔ)存于合適的環(huán)境和溫度下，并在有效期內(nèi)使用。儲(chǔ)存不當(dāng)或產(chǎn)品過期可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。打開包裝后請(qǐng)盡快使用試紙條，以免因試紙條受潮影響試驗(yàn)結(jié)果。檢測(cè)環(huán)境光線不足，操作者色弱等因素均可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。

5. 使用完畢后，應(yīng)盡快將紙條裝進(jìn)密封袋，妥善處理。本產(chǎn)品為一次性使用產(chǎn)品，僅限科研，請(qǐng)勿重復(fù)使用。

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