擬南芥Col-0葉綠體部分(1)，基質部分(2)，膜部分(3)。在提取緩沖液(50mM hepe - koh pH7.3，shanlichun330mM, EDTA 2mM, 0.1% BSA, 1mM DTT, 5mM抗氧化劑)中研磨60g擬南芥葉片，分離葉綠體。在2000g, 4°C，離心5分鐘后，粗葉綠體在提取緩沖液中重懸

用40%-80% percoll梯度分層，7000g 4°C離心20分鐘。保存完整的葉綠體，用5體積的提取緩沖液洗滌，離心2000g, 4℃，5min。裂解緩沖液為

加入(Hepes-KOH pH8 30mM, MgOAc 10mM, KOAc 60mM, DTT 1mM和蛋白酶

抑制劑)，保留總葉綠體的分離。將樣品18000g, 30min離心分離基質部分，而顆粒則是加入裂解緩沖液的膜部分。每個組分中加入NP40，比例為1%，用bradford法測定蛋白質含量。將各組分與3X SDS-PAGE緩沖液(150mM Tris pH6.8, 150mM NaCl, 100mm DTT, 20%甘油，3%SDS)混合，在95℃變性10分鐘。在12% SDS-PAGE上分離10 ug蛋白，使用槽轉移將其印跡至PVDF過夜。墨跡被堵塞

5%牛奶加入TBS-T - 0.05%，室溫(RT)攪拌1h。

將印跡置于一抗中，稀釋1:5 000,RT時用TBS-T攪拌1h。倒出抗體溶液，將印跡簡單沖洗兩次，然后在RT下攪拌的TBS-T中洗滌3次，共5分鐘。印跡用二抗(抗兔IgG馬蘿卜過氧化物酶結合，AS09 602，來自Agrisera)稀釋至1:10 000，在室溫下攪拌1h。墨跡是按原樣洗的

以上，用GE Healthcare檢測試劑開發(fā)1min。

曝光時間為10秒到1分鐘。