免疫原

擬南芥ClpB1 P42730、At1g74310等含AAA2結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)合成的klh偶聯(lián)肽

主機(jī)的兔子

單克隆多克隆

純度血清

格式凍干

數(shù)量200µl

復(fù)配時(shí)，加200µl無(wú)菌水

-20°C保存凍干/重組;一旦重組，使公平，以避免重復(fù)凍融循環(huán)，請(qǐng)記住，在打開(kāi)之前，旋轉(zhuǎn)管短暫，以避免任何損失，凍干材料粘附在瓶蓋或管的兩側(cè)

Western blot (WB)

推薦稀釋倍數(shù)1:20 00 (WB)

可溶性蛋白質(zhì)的20μg從舊三星期的茄屬植物tuberosum(1)和(2)擬南芥,一周老Lupinus狹葉的(3),Pisum一(4)和玉蜀黍l .(5)葉提取與含有50 MмHepes-KOH的緩沖區(qū),pH值7.5,330м山梨糖醇,2мM EDTA, 1 M MgCl2мм5 M抗壞血酸鹽,0.05%牛血清白蛋白與樣品緩沖液混合，在70℃下變性5 min。樣品在10%的SDS-PAGE上分離，用罐式濕轉(zhuǎn)移(Bio-Rad)在20%甲醇的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)移緩沖液中印跡1h至硝化纖維素膜(Amersham proan)。在阻斷步驟之前，用1% Ponceau S染色檢查蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上的情況。印跡保存在緩沖液(5%低脂牛奶1xPBS, 0.1%吐溫-20)中，室溫(RT)攪拌1h。印跡在一抗中以1:2 000稀釋，攪拌，RT孵育1小時(shí)。倒出抗體溶液，簡(jiǎn)單漂洗2次，然后在PBS-T中攪拌洗滌1次，15分鐘，3次，5分鐘。用二抗(山羊抗兔IgG, AS09 602, Agrisera)稀釋至1:30 000 (Agrisera)，攪拌RT孵育1h。使用Clarity Western ECL Substrate和ChemiDoc檢測(cè)系統(tǒng)(Bio-Rad)沖洗印跡5分鐘。曝光時(shí)間為60秒