產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡介

NBD C6-Ceramide是一種熒光鞘脂類似物，常用來研究鞘脂運(yùn)輸和代謝機(jī)制。也常用作活細(xì)胞和固定細(xì)胞內(nèi)高爾基體的選擇性染色劑。環(huán)境敏感性的NBD染料在水溶性環(huán)境下呈弱熒光，但在非質(zhì)子溶劑和其它非極性環(huán)境內(nèi)熒光增加，zui大激發(fā)和發(fā)射波長約為466/536nm。

產(chǎn)品性質(zhì)

分子式（Formula）：C30H49N5O6

CAS NO.：94885-02-6

分子量（Molecular Weight）：575.74

外觀（Appearance）：液體

Ex/Em：466/536nm (in MeOH)

溶解性：溶于DMSO、DMF.lv

步驟說明

1.NBD C6-Ceramide工作液的配制：

將低溫保存的產(chǎn)品從冰箱取出后置于室溫至少20min，低速離心后，往1mg凍干粉內(nèi)加入347µl高質(zhì)量無水DMSO，使其充分溶解，即配制得到5mM的儲存液。根據(jù)單次用量分裝置于-20℃凍存，避免反復(fù)凍融。

吸取一定量NBD C6-Ceramide（5mM）儲存液按照1：1000的比例用HBSS/HEPES來稀釋，混勻后即為NBD C6-Ceramide工作液（5µM），工作液請現(xiàn)配現(xiàn)用。

【注意】：NBD C6-Ceramide的工作濃度請結(jié)合實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊约皩?shí)驗(yàn)對象進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。。

2.活細(xì)胞高爾基體的熒光標(biāo)記

去除細(xì)胞培養(yǎng)液，用適量的溶液如HBSS/HEPES或其他緩沖液來洗滌生長在蓋玻片上的細(xì)胞。

去除洗滌液，加入新鮮配制的NBD C6-Ceramide工作液（5µM），4℃孵育30min。

吸走染色液，用冰浴預(yù)冷的細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞3次左右，換新鮮培養(yǎng)液37℃再孵育30min。

用新鮮培養(yǎng)液再洗滌一次，隨后用熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀察。此時(shí)可觀察到高爾基體呈明亮的強(qiáng)熒光染色，而細(xì)胞內(nèi)的其他膜系統(tǒng)呈比較微弱的熒光染色。

3．固定細(xì)胞高爾基體的熒光標(biāo)記

文獻(xiàn)報(bào)道NBD C6-Ceramide適用于固定細(xì)胞染色，而BODIPY FL C5-ceramide和BODIPY TR-ceramide不適合。染色條件總的來說沒那么嚴(yán)格。然而，避免使用去污劑和甲醇/丙酮固定劑。

注意事項(xiàng)

1）不能儲存在無霜冰箱，建議按照單次用量分裝于-20℃凍存。

2）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20℃避光干燥保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個(gè)月。

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