活性氧（ROS）是氧正常代謝的天然副產物，在細胞信號傳導中起重要作用。但是，在與氧化應激相關的狀態(tài)下，ROS水平會急劇增加。ROS的積累會嚴重破壞細胞結構。氧化應激在心血管疾病，糖尿病，骨質疏松癥，中風，炎性疾病，許多神經(jīng)退行性疾病和癌癥中的作用已得到*。ROS測量將有助于確定氧化應激如何調節(jié)各種細胞內途徑。Cell Meter™熒光ROS檢測試劑盒使用我們*的ROS傳感器來定量活細胞中的ROS。ROS Green具有細胞滲透性。與ROS反應時會生成綠色熒光。該套件是經(jīng)過優(yōu)化的“混合閱讀” 與HTS液體處理儀器兼容的測定形式。Cell Meter™熒光ROS測定試劑盒提供了一種靈敏的一步熒光測定法，可在培養(yǎng)一小時后檢測活細胞中的細胞內ROS。該測定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行，無需分離步驟即可輕松實現(xiàn)自動化。使用熒光酶標儀或熒光顯微鏡可輕松讀取其信號。

平臺

組件

協(xié)議范例

乍看上去

協(xié)議摘要

1. 在生長培養(yǎng)基中準備細胞
2. 添加Amplite™ROS Green工作溶液（對于96孔板為100 µL /孔，對于384孔板為25 µL /孔） 
3. 將細胞在37°C染色60分鐘
4. 用測試化合物處理細胞以誘導ROS
5. 在Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）或帶有FITC濾光片組的熒光顯微鏡下監(jiān)控熒光增加（底部讀取模式）

重要說明
開始實驗之前，請在室溫下解凍所有試劑盒組件。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，制備后應儲存在-20°C下。避免重復凍融循環(huán)。

1. Amplite™ROS Green儲備溶液（500X）：
將40 µL DMSO（組分C）添加到Amplite™ROS Green（組分A）小瓶中，并充分混合以制成500X Amplite™ROS Green儲備溶液。避光。注意：20 µL 500X Amplite™ROS Green儲備溶液足以用于1個板。為了存放，請將管子緊緊密封。

準備工作溶液

將20 µL 500X Amplite™ROS Green儲備溶液添加到10 mL的測定緩沖液（組分B）中，并充分混合以制成Amplite™ROS Green工作溶液。注意：此Amplite™ROS Green工作溶液在室溫下至少可穩(wěn)定2小時。

程序

1. 將100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Amplite™ROS Green工作溶液添加到細胞板中。
    
2. 將細胞在5％CO ₂和37°C的培養(yǎng)箱中孵育1小時。
    
3. 在所需的緩沖液（例如PBS或HHBS）中，用20 µL 11X測試化合物（96孔板）或10 µL 6X測試化合物（384孔板）處理細胞。對于對照孔（未處理的細胞），添加相應量的化合物緩沖液。
    
4. 為了誘導ROS，在室溫下孵育或在5％CO單元板₂，37℃的培養(yǎng)箱中至少15分鐘或在期望的時間段（30分鐘Hela細胞用1mM H處理₂ ö ₂）。
    
5. 使用熒光酶標儀（Ext / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm））監(jiān)控熒光強度，或使用帶有FITC濾光片組的熒光顯微鏡觀察細胞。

   22970	Cell Meter™熒光法線粒體過氧化物檢測試劑盒*適合于流式細胞儀*	Cell Meter™ Fluorimetric Mitochondrial Superoxide Activity Assay Kit*Optimized for Flow Cytometry*	100 Tests
   22971	Cell Meter™熒光法線粒體過氧化物檢測試劑盒*適合于酶標儀*	Cell Meter™ Fluorimetric Mitochondrial Superoxide Activity Assay Kit*Optimized for Microplate Reader*	200 Tests
   23000	Cell Meter™細胞自噬檢測試劑盒*藍色熒光*	Cell Meter™ Autophagy Assay Kit *Blue Fluorescence*	200 Tests