活性氧（ROS）是含有氧的化學(xué)活性分子。實例包括超氧化物，羥基自由基，單線態(tài)氧和過氧化物。由于存在不配對的價殼電子，ROS具有高反應(yīng)活性。ROS是氧正常代謝的天然副產(chǎn)物，在細(xì)胞信號傳導(dǎo)和體內(nèi)平衡中起重要作用。但是，在環(huán)境壓力（例如紫外線或熱暴露）期間，ROS水平可能會急劇增加。這可能會嚴(yán)重?fù)p壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。累積地，這稱為氧化應(yīng)激。ROS也由外源如電離輻射產(chǎn)生。在氧化應(yīng)激條件下，ROS的產(chǎn)生顯著增加，導(dǎo)致膜脂質(zhì)，蛋白質(zhì)和核酸的隨后改變。這些生物分子的氧化損傷與衰老以及各種病理事件有關(guān)，包括動脈粥樣硬化，致癌作用，缺血性再灌注損傷和神經(jīng)退行性疾病。ROS Brite™570試劑是一種新型的熒光探針，可使用常規(guī)熒光顯微鏡，高含量成像，微孔板熒光或流式細(xì)胞術(shù)測量細(xì)胞中的氧化應(yīng)激。滲透細(xì)胞的ROS Brite™570試劑是非熒光的，在ROS氧化后會產(chǎn)生亮橙色熒光?？梢允褂脽晒獬上?，高含量成像，微孔板熒光測定法或流式細(xì)胞術(shù)測量所得的熒光。ROS Brite™570試劑是一種新型的熒光探針，可使用常規(guī)熒光顯微鏡，高含量成像，微孔板熒光或流式細(xì)胞術(shù)測量細(xì)胞中的氧化應(yīng)激。滲透細(xì)胞的ROS Brite™570試劑是非熒光的，在ROS氧化后會產(chǎn)生亮橙色熒光。可以使用熒光成像，高含量成像，微孔板熒光測定法或流式細(xì)胞術(shù)測量所得的熒光。ROS Brite™570試劑是一種新型的熒光探針，可使用常規(guī)熒光顯微鏡，高含量成像，微孔板熒光或流式細(xì)胞術(shù)測量細(xì)胞中的氧化應(yīng)激。滲透細(xì)胞的ROS Brite™570試劑是非熒光的，在ROS氧化后會產(chǎn)生亮橙色熒光。可以使用熒光成像，高含量成像，微孔板熒光測定法或流式細(xì)胞術(shù)測量所得的熒光。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. ROS Brite™儲備溶液：
在DMSO中準(zhǔn)備10至20 mM ROS Brite™儲備溶液。注意：原液可以分裝在-20 ^o C 下儲存。避光。

準(zhǔn)備工作溶液

ROS Brite™工作溶液：
用20 mM Hepes緩沖液（HHBS）將DMSO儲備溶液稀釋到Hanks溶液中，制成5至10 µM工作溶液。注意：使用前應(yīng)使工作溶液新鮮。

程序

1. 根據(jù)需要處理細(xì)胞（例如，用50-100 nM血管緊張素II處理RASM細(xì)胞3-5小時）。
    
2. 將細(xì)胞與ROS Brite™（5-10 µM）在37°C下孵育15 -30分鐘。注意：所使用的ROS Brite™的濃度隨細(xì)胞系的不同而不同，需要測試不同的濃度才能獲得*劑量。
    
3. 用HHBS緩沖區(qū)替換工作溶液。
    
4. 用適當(dāng)?shù)臒晒鈨x器（例如熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀或體內(nèi)成像儀器）分析細(xì)胞。

計算器

普通儲備溶液的制備

表1.重構(gòu)特定質(zhì)量的ROS Brite™570所需的DMSO體積*已優(yōu)化用于檢測給定濃度的活性氧（ROS）*。請注意，該體積僅用于制備儲備溶液。有關(guān)適當(dāng)?shù)膶嶒?生理緩沖液，請參閱樣本實驗方案。

糖度計算器

輸入任何兩個值（質(zhì)量，體積，濃度）以計算第三個值。