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huangpiaoling是在大多數(shù)人體組織和體液中發(fā)現(xiàn)的嘌呤堿。huangpiaoling衍生出，包括氨chajian，IBMX，對huangpiaoling，yitongkekejian，kekejian和chajian，它們可以刺激心率，收縮力，高濃度的心律不齊。因此，檢測生物樣品中的huangpiaoling改變對于疾病診斷和治療監(jiān)測很重要。Amplite™熒光huangpiaoling測定試劑盒提供了一種快速，超靈敏的方法來測定huangpiaoling?？梢砸苑奖愕?6孔或384孔微量滴定板形式進行。在huangpiaoling氧化酶存在下，huangpiaoling被氧化為尿酸，釋放出過氧化氫，可以使用熒光酶標儀通過Amplite™Red進行特異性測定。
平臺黃嘌
| 熒光酶標儀 | |
| 激發(fā) | 540納米 |
| 發(fā)射 | 590納米 |
| 隔斷 | 570納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
組件
| 組件A：Amplite™紅色底物（光敏） | 1個小瓶 |
| 組分B：測定緩沖液 | 1瓶（20毫升） |
| 組分C：辣根過氧化物酶（凍干） | 1個小瓶 |
| 成分D：huangpiaoling標準品 | 1小瓶（100 µL，20 mM） |
| 成分E：huangpiaoling氧化酶（凍干） | 1個小瓶 |
| 成分F：DMSO | 1小瓶（100 µL） |
協(xié)議范例
乍看上去
協(xié)議摘要
準備huangpiaoling標準品或測試樣品（50 µL）
加入huangpiaoling工作溶液（50 µL）
在室溫下孵育30-60分鐘
在Ex / Em = 540/590 nm時讀取熒光強度
重要說明
開始實驗之前，請在室溫下解凍所有試劑盒組件。
儲備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. Amplite™Red底物儲備液（250X）：
將40 µL DMSO（組分F）添加到Amplite™Red底物（組分A）小瓶中。注意：Amplite™Red底物在硫醇（如二硫蘇糖醇（DTT））的存在下不穩(wěn)定。反應(yīng)中DTT的終濃度應(yīng)不高于10 µM。該測定應(yīng)在pH 7-8（建議pH 7.4）下進行，因為Amplite™Red在pH> 8.5時不穩(wěn)定。
2. HRP儲備溶液（500X）：
將100 µL測定緩沖液（組分B）添加到辣根過氧化物酶（組分C）小瓶中。
3.huangpiaoling氧化酶（XO）儲備溶液（100X）：
將100 µL分析緩沖液（組分B）加入小瓶huangpiaoling氧化酶（E），制成huangpiaoling氧化酶（XO）儲備溶液（100X）。
配制標準溶液
為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計
將5 µLhuangpiaoling標準品（組分D）添加到995 µL測定緩沖液（組分B）中，得到100 µMhuangpiaoling標準溶液。取200 µL 100 µMhuangpiaoling標準溶液進行1：3連續(xù)稀釋，以得到連續(xù)稀釋的huangpiaoling標準液（X1-X7）。
準備工作溶液
將20μLAmplite™Red Substrate儲備液（250X），10μLHRP儲備液（500X）和50μLhuangpiaoling氧化酶儲備液（100X）加入5 mL的測定緩沖液（組分B）中，制成總體積5.08毫升。注意： 避免直接暴露在光線下并立即使用。
程序
表1。huangpiaoling標準品和測試樣品在黑色壁/實心底部96孔微孔板中的布局。X =huangpiaoling標準品（X1-X7，0.137至100 µM）；BL =空白對照；TS =測試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| X1 | X1 | ... | ... |
| X2 | X2 | ... | ... |
| X3 | X3 | ||
| X4 | X4 | ||
| X5 | X5 | ||
| X6 | X6 | ||
| X7 | X7 |
表2.每個孔的試劑組成。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| X1-X7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋（0.137至100 µM） |
| BL | 50微升 | 分析緩沖液（組分B） |
| TS | 50微升 | 測試樣品 |
根據(jù)表1和表2提供的布局，準備huangpiaoling標準品（X），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL。
在huangpiaoling標準品，空白對照和測試樣品的每個孔中加入50 µLhuangpiaoling工作溶液，使總huangpiaoling測定體積為100 µL /孔。對于384孔板，將25 µL工作溶液加到每個孔中，總體積為50 µL /孔。
在避光條件下，室溫下將反應(yīng)孵育30至60分鐘。
使用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)= 530-570 nm（在540 nm處*），發(fā)射= 590-600 nm（在590 nm處*），截止= 570 nm處監(jiān)測熒光的增加。
13843 Amplite™熒光法huangpiaoling檢測試劑盒 Amplite™ Fluorimetric Xanthine Assay Kit 200 Tests 13845 Amplite™比色法次氯酸檢測試劑盒 Amplite Colorimetric Hypochlorite (Hypochlorous Acid) Assay Kit 200 Tests
