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bingansuan氨基轉移酶（ALT），也稱為血清guansuan丙酮酸轉氨酶（GPT），是轉移酶家族的成員。它催化bingansuan和guansuan之間α-氨基的可逆轉移，并且是氨基酸代謝中的重要酶。ALT主要在肝臟中發(fā)現(xiàn)，少量在心臟，肌肉和腎臟中發(fā)現(xiàn)。在健康受試者中，血清ALT水平較低。但是，當細胞受損時，例如急性和慢性肝炎，梗阻性黃疸，肝癌，心肌梗塞，ALT可能會滲入血流，并且ALT水平會顯著升高。因此，測定血清ALT水平具有重要的臨床和診斷意義。Amplite™熒光bingansuan氨基轉移酶測定試劑盒提供了快速靈敏的方法來測定各種生物樣品中的ALT。ALT催化bingansuan和α-酮戊二酸反應為丙酮酸和guansuan。guansuan產(chǎn)物是通過酶聯(lián)反應循環(huán)產(chǎn)生紅色熒光產(chǎn)物來測量的。信號可以通過熒光酶標儀讀取。使用Amplite™熒光bingansuan氨基轉移酶測定試劑盒，在100 µL反應體積中僅檢測到4 mU / mL ALT。該測定法是魯棒的，并且可以容易地適用于多種應用。使用Amplite™熒光bingansuan氨基轉移酶測定試劑盒，在100 µL反應體積中僅檢測到4 mU / mL ALT。該測定法是魯棒的，并且可以容易地適用于多種應用。使用Amplite™熒光bingansuan氨基轉移酶測定試劑盒，在100 µL反應體積中僅檢測到4 mU / mL ALT。該測定法是魯棒的，并且可以容易地適用于多種應用。
| 熒光酶標儀 | |
| 激發(fā) | 540納米 |
| 發(fā)射 | 590納米 |
| 隔斷 | 570納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
組件
| 組分A：ALT酶混合物 | 1瓶（凍干粉） |
| 組分B：ALT檢測緩沖液 | 瓶（10毫升） |
| 成分C：NAD | 1個小瓶 |
| 成分D：ALT陽性對照 | 1小瓶（10 U） |
準備ALT標準或測試樣品（50 µL）
加入ALT工作溶液（50 µL）
在37°C下孵育30分鐘至60分鐘
監(jiān)測Ex / Em = 540/590 nm時的熒光增加
重要說明
開始實驗前，在室溫下解凍一瓶成分A和B。
儲備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復凍融循環(huán)。
1. ALT標準溶液：
將100 µL DPBS加入ALT陽性對照（組分D）的小瓶中，制成100 U / mL ALT儲備液。
配制標準溶液
為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計
將10 µL 100 U / mL ALT標準溶液加到含0.1％BSA的990 µL DPBS緩沖液中，以生成1000 mU / mL ALT標準溶液（ALT7）。取1000 mU / mL ALT標準溶液并進行1：3連續(xù)稀釋，以得到ALT標準品（ALT6-ALT1）的連續(xù)稀釋液。
準備工作溶液
1. NAD溶液（100X）：
將100 µL ddH2O加入NAD小瓶（組分C）。
2. ALT酶混合物溶液：
將10 mL ALT分析緩沖液（組分B）添加到ALT酶混合物（組分A）瓶中，并充分混合。
3. ALT工作溶液：
將整個小瓶100X NAD溶液（從1開始）添加到ALT酶混合物溶液（從2開始）中，以得到ALT工作溶液。
注意： 此ALT工作溶液足以容納兩個96孔板。它在室溫下不穩(wěn)定，應在2小時內及時使用，并避免暴露在光線下?；蛘?，可以通過將200μLH 2 O添加到組分A的瓶子中制成50倍的ALT酶混合物儲備溶液，然后通過將儲備溶液與測定緩沖液（組分B）和100x NAD混合來制備ALT工作溶液。按比例求解。
程序
表1.黑色96孔微孔板中ALT標準品和測試樣品的布局。ALT = ALT標準（ALT1-ALT7，1至1000 mU / mL）; BL =空白對照；TS =測試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| ALT1 | ALT1 | ... | ... |
| ALT2 | ALT2 | ... | ... |
| ALT3 | ALT3 | ||
| ALT4 | ALT4 | ||
| ALT5 | ALT5 | ||
| ALT6 | ALT6 | ||
| ALT7 | ALT7 |
表2.黑色96孔微孔板中的ALT標準品和測試樣品的布局。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| ALT1-ALT7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋（1至1000 mU / mL） |
| BL | 50微升 | 含0.1％BSA的DPBS |
| TS | 50微升 | 測試樣品 |
根據(jù)表1和表2提供的布局，將ALT標準品（ALT），空白對照（BL）和測試樣品（TS）制備成黑色的96孔微孔板。對于384孔板，請使用25 µL每孔試劑，而不是50 µL。 注意：如果需要，在含0.1％BSA的DPBS緩沖液中將測試樣品稀釋至適當?shù)臐舛确秶ò碅LT標準指示）。
在ALT標準液，空白對照和測試樣品的每個孔中加入50 µL ALT工作溶液，以使ALT總測定體積為100 µL /孔。對于384孔微孔板，向每孔中加入25 µL ALT工作溶液，總體積為50 µL /孔。
避光保存，在37°C下孵育反應30分鐘至60分鐘。注意：空白控件的背景將隨著時間而增加。
使用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)= 530-570 nm，發(fā)射= 590-600 nm（*Ex / Em = 540/590 nm，在570 nm截止）下監(jiān)測熒光的增加。
13802 Amplite™熒光法bingansuan轉氨酶檢測試劑盒 Amplite™ Fluorimetric Alanine Aminotransferase Assay Kit 200 Tests 13803 Amplite™比色法bingansuan轉氨酶檢測試劑盒 *藍色* Amplite™ Colorimetric Alanine Aminotransferase Assay Kit *Blue Color* 200 Tests
